[发明专利]一种猪圆环病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒三联病毒样颗粒疫苗及其制备方法

说明书

发明领域

本发明属于生物制药领域，涉及一种猪圆环病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒三联病毒样颗粒疫苗及其制备方法，特别涉及一种以含有2-型猪圆环病毒的核衣壳蛋白、猪细小病毒VP2蛋白抗原表位、以及猪繁殖与呼吸综合症病毒Gp5蛋白组成的三联病毒样颗粒疫苗(Trivalent VLP)及其制备方法。 

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)将导致猪群免疫力下降，并与猪断奶后多系统衰弱综合症(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)、猪皮炎及肾病综合症(Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome，PDNS)、猪繁殖障碍(Porcine reproductive failure)、猪呼吸道疾病综合征(Porcine Respiratory Disease Syndrome，PRDC)、猪增生性坏死性肺炎(Porcine Necrotizing Pneumonia，PNP)、猪先天性振颤(Porcine Congenital Tremor，CT)等多种疾病有联系。猪圆环病毒(PCV)是1974年在一种体外培养的猪肾细胞系PK-15中首次发现的，当时认为是一种细胞培养的污染物，因为其并不具有导致细胞病变等典型的病毒样作用，所以称为小病毒样核酸污染物。随后陆续有报道指出这种小病毒样核酸污染物其实是一种病毒，这种病毒是一种小型无包膜的12面体病毒，核心包含一个单股环状DNA基因组，不导致动物发病及传代培养的细胞发生病变，并正式将其命名为猪圆环病毒(Procine Circovirus，PCV)。但1994年Hines等首先报道了在患有先天性振颤(Congenital Tremor)的仔猪中发现了PCV样病毒(PCV-like Virus)，1995年Allan等人也在几例猪的死胎中发现了PCV的抗体，这将PCV与各种疾病联系到了一起。之后对PCV的报道渐渐指向了一种分离自病猪而不是细胞培养物的“新型猪圆环病毒(Novel PCV)”。随着对该新型PCV的深入研究，发现从基因组到血清型都与传统的PCV存在差异，随之国际上将这种新型的、可以致病的猪圆环病毒命名为2-型猪圆环病毒(PCV-2)，同时将细胞培养物中发现的非致病性猪圆环病毒命名为1-型猪圆环病毒(PCV-1)。 在临床中，PCV-2主要感染5-12周龄的小猪，病猪表现为生长缓慢、被毛粗乱、营养不良、呼吸困难、黄胆、粘膜苍白，可成为僵猪，严重可导致死亡。有证据表明，PCV-2的致病性主要是由于其对免疫系统的损伤造成的，研究发现，感染PCV-2的病猪淋巴细胞会发生明显减少。Darwich等报道，患有猪断奶后多系统衰弱综合症(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)的病猪出现CD3+、CD4+T淋巴细胞减少，CD8+T淋巴细胞没有发生明显变化，而典型的由PCV-2感染而引起PMWS病症的患猪出现了CD8+T淋巴细胞的减少。而且有证据表明PCV-2在淋巴器官中的数量与患猪淋巴细胞的消耗以及外周血中IgM及CD8+T淋巴细胞的减少有着直接的关系。Nielsen等人报道，患猪在PCV-2感染10天后淋巴细胞开始减少，在第14天时出现显著下降，且这种下降会一直持续到患猪死亡。而且通过试验证实，所有的T淋巴细胞亚群都会由于PCV-2的感染而出现数量上的减少。Sarli等人报道，PCV-2对淋巴细胞的消耗还包括树突状细胞和B淋巴细胞，同时Chianini等人根据B淋巴细胞及T淋巴细胞数量的下降程度，将其分为轻度损伤、中度损伤以及重度损伤，其中重度损伤可致淋巴细胞彻底消失。这充分说明了PCV-2的感染可导致免疫机能下降，同时也为患猪由于PCV-2的感染并与其他病原体的并发感染而导致诸如PMWS一类疾病的发生提供了理论依据。研究发现，PCV-2的感染通常伴随猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)、卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)、衣原体(Chlamydia spp.)、肺曲霉病(pulmonary aspergillosis)、隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)等共同感染而引起疾病的发生。其中PCV-2感染作为主要病因的疾病是猪断奶后多系统衰弱综合症(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)，在PCV-2感染的同时通常伴随有PRRSV及PPV的感染，而且在实验室中PCV-2的单独感染也可造成PMWS的典型症状。