[发明专利]一种猪圆环病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒三联病毒样颗粒疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种猪圆环病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒三联病毒样颗粒疫苗，(简称Triple VLP疫苗)，其特征在于该疫苗含有2-型猪圆环病毒(PCV-2)主要结构蛋白CAP蛋白，猪细小病毒(PPV)结构蛋白VP2的抗原表位，与B亚群猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)结构蛋白GP5的抗原表位组成的VLP。

2.如权利要求1所述的Triple VLP疫苗，其特征在于该疫苗涉及PCV-2主要结构蛋白CAP蛋白，PPV结构蛋白VP2的表位的1-57核酸序列，PRRSV结构蛋白GP5的表位的88-156核酸序列；其中，所述CAP蛋白核酸序列包括来自PCV-2a的HR、HB0603、HB0604、BJ0602、SZ亚型的CAP蛋白核酸序列，以及来自PCV-2b的BJ-HB、GD、GD-TS、BJ0401、BJ0402亚型的CAP蛋白核酸序列，以及来自PCV-2d的GS04、SD、TJ、TJ06亚型的CAP蛋白核酸序列，以及来自PCV-2e的GX0602、JX0602、HB0602、LN06、HN0601亚型的CAP蛋白核酸序列；其中，所述PPV VP2蛋白的1-57核酸序列包括来自PPV的NADL-2、Kresse、POVG、Challenge、VRI-1亚型VP2蛋白的1-57核酸序列；其中所述PRRSV GP5蛋白88-156核酸序列包括来自PRRSV的CH-1a、BJ-4、HB-1(SH)、Em2007、JXA1亚型GP5蛋白的88-156核酸序列。

3.如权利要求1-2任一所述的Triple VLP疫苗，其特征在于该疫苗含有涉及PCV-2的CAP蛋白，并携带有PPV的VP2蛋白抗原表位、以及PRRSV的Gp5蛋白抗原表位，所述CAP蛋白包括来自PCV-2a的HR、HB0603、HB0604、BJ0602、SZ、亚型的CAP蛋白，以及来自PCV-2b的BJ-HB、GD、GD-TS、BJ0401、BJ0402、亚型的CAP蛋白，以及来自PCV-2d的GS04、SD、TJ、TJ06亚型的CAP蛋白，以及来自PCV-2e的GX0602、JX0602、HB0602、LN06、HN0601亚型的CAP蛋白；其中，所述PPV VP2蛋白的抗原表位包括来自PPV的NADL-2、Kresse、POVG、Challenge、VRI-1亚型VP2蛋白1-19位肽段；其中所述PRRSV GP5蛋白的抗原表位包括来自PRRSV CH-1a、BJ-4、HB-1(SH)、Em2007、JXA1亚型GP5蛋白的30-52位肽段。

4.如权利要求3所述的Triple VLP疫苗，其特征在于该疫苗包含一个携带有PCV-2CAP蛋白、PPV VP2蛋白抗原表位、PRRSV GP5蛋白抗原表位的重组真核表达载体、鸡成纤维细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞；其中，所述真核表达载体选自：①pHWD2000；②pOPI3CAT；③pCAGGS；④pcDNA6/TR；⑤pCMV-HA。所述鸡成纤维细胞选自：①UMNSAH/DF-1细胞；②分离9-10龄禽成纤维细胞。所述哺乳动物细胞选自：①PK-15细胞；②VERO细胞；③COS细胞；④人二倍体细胞；⑤BHK细胞；⑥CHO细胞；⑦MDCK细胞；⑧Hep-G2细胞；所述昆虫细胞选自：①Tn5细胞；②SF9 Cell细胞。

5.如权利要求4所述的Triple VLP疫苗，其特征在于其中所述的pHWD2000载体是由pHW2000载体改造得到，包括去掉pHW2000载体上游的pCMV启动子，并用鸡β-actin蛋白启动子替换，同时在鸡β-actin蛋白启动字上游插入hCMV-IE增强子，改造后的pCWD2000可以在真核系统中高效表达外源基因，同时pCWD2000有着较小的分子量，可以携带较大的外源基因片段。

6.如权利要求1-5任一所述的Triple VLP疫苗，其特征在于该疫苗不含有佐剂，或含有如下佐剂中的一种或几种：①新型纳米铝佐剂；②铝盐：氢氧化铝或磷酸铝；③水凝胶佐剂：季胺化的壳聚糖、④rLT：重组不耐热性肠毒素。其特征在于该疫苗制成多种临床适用的剂型：注射剂型、滴鼻剂型、饮水剂型。