[发明专利]一种分离培养人胚嗅鞘细胞以及纯化的方法

权利要求书

1.一种分离培养人胚嗅鞘细胞以及纯化的方法，包括下述步骤：

S1：OECs的分离培养：取2-3月龄流产胎儿，解剖显微镜下分离出两侧嗅球，移入含D-Hank’s液的培养皿，在解剖显微镜下去除毛细血管网，将嗅球最外层的嗅神经层、小球层连同包被的软膜一起剥下；用D-Hank’s液洗2次，用虹膜剪剪碎后用0.25％胰酶37℃消化30min，加入含血清培养液终止消化；使用200目滤网过滤去除大块组织，过滤液600g离心5min；弃上清，用含Forskolin和BPE的全培养液重悬，调整细胞浓度为1×105/ml，接种于p75包被的培养皿；每2天换液1次。

S2：培养皿的包被：将p75单抗用D-Hanks液配制成1∶1000的浓度，浸没包被培养皿皿底后吸出，置超净台自然干燥后备用，用前培养液湿润。

S3：OECs的纯化：培养7天后更换条件培养液，培养48小时后替换为全培养液；以及

S4：OECs的染色鉴定：将纯化后生长良好的细胞，用常规方法进行免疫细胞化学染色；贴壁细胞去培养基，用PBS洗3次，经4％的多聚甲醛固定30min。PBS洗涤3次，0.3％TritonX-100处理20min。PBS漂洗3次，10％羊血清室温封闭20mi n，吸出血清，加入鼠抗人p75IgG单抗，37℃孵育2小时后PBS洗3次，加入FITC结合的羊抗鼠IgG(1∶500)孵育30min。