[发明专利]生产苹果酸的方法

权利要求书

1.生产苹果酸的方法，其特征在于，具体步骤为：

a．种子活化

将出芽短梗霉（Aureobasidium pullans）NRRL Y-2311-1接种于种子培养基，温度为23-30℃震荡培养，得活化种子液；所述种子培养基为葡萄糖40-100 g/L、NH₄NO₃1-5 g/L、KH₂PO₄ 0.005-0.3g/L、ZnSO₄ 0.005-0.3g/L、MgSO₄ 0.005-0.3g/L、玉米浆0.05-3 g/L和CaCO₃ 10-50 g/L；

b. 发酵

将步骤a所得活化种子液接种于发酵培养基，温度为23-30℃震荡培养144 小时以上，固液分离，收集液体，得发酵液；所述发酵培养基为糖80-120g/L、NH₄NO₃ 1-5g/L、KH₂PO₄ 0.005-0.3g/L、ZnSO₄ 0.005-0.3g/L、MgSO₄ 0.005-0.3g/L、玉米浆0.05-3g/L和CaCO₃ 10-50 g/L；所述糖为葡萄糖、木糖、玉米秸秆水解液或木质纤维素水解液中的至少一种；

所述玉米秸秆水解液的制备方法是取玉米秸秆，粉碎，加水，用酸调节pH至2.5，加热至100℃充分水解，然后用碱中和，加入纤维素酶和半纤维素酶，50℃恒温水解，过滤，收集滤液，即得玉米秸秆水解液；

所述木质纤维素水解液的制备方法是取木质纤维，粉碎，用质量分数为7%的硫酸浸泡，再加热至160-200℃充分水解，然后用碱中和，剩余残渣再用质量分数为2%的硫酸在温度为180-240℃充分水解，过滤，收集滤液，即得木质纤维素水解液；

c. 醇沉

将步骤b所得发酵液用乙醇沉淀，固液分离，收集沉淀，得聚苹果酸；

d. 水解

将步骤c所得聚苹果酸进行酸水解，得水解液；

e．浓缩结晶

将步骤d所得水解液浓缩，结晶，得苹果酸。

2.根据权利要求1所述生产苹果酸的方法，其特征在于：步骤a中所述出芽短梗霉的接种按照出芽短梗霉与种子培养基的体积比为1:100-1000进行；所述震荡培养为在转速180-300 rpm下培养36-96小时；所述种子培养基为葡萄糖60-80g/L、NH₄NO₃ 2-4g/L、KH₂PO₄ 0.05-0.2g/L、ZnSO₄ 0.05-0.2g/L、MgSO₄ 0.05-0.2g/L、玉米浆0.5-2g/L和CaCO₃ 20-50 g/L。

3.根据权利要求1所述生产苹果酸的方法，其特征在于：步骤b中所述活化种子液的接种按照活化种子液与发酵培养基的体积比为1:10-20进行；所述震荡培养为在转速180-700 rpm下培养144-168小时；所述发酵培养基为糖90-100g/L、NH₄NO₃ 2-4g/L、KH₂PO₄ 0.05-0.2g/L、ZnSO₄ 0.05-0.2g/L、MgSO₄ 0.05-0.2g/L、玉米浆0. 5-2g/L和CaCO₃ 20-50 g/L；

所述玉米秸秆水解液的制备方法是取玉米秸秆，粉碎，按照固液体积比为1:5-10加水，用硫酸调节pH至2.5，加热至100℃水解1-5小时，然后用氢氧化钙中和，加入纤维素酶和半纤维素酶，50℃恒温水解1-10小时，过滤，收集滤液，得玉米秸秆水解液；

所述木质纤维素水解液的制备方法是取木质纤维，粉碎，用质量分数为7%的硫酸浸泡2小时，加热至160-200℃水解2-10分钟，然后用生石灰中和，剩余残渣再用质量分数为2%的硫酸在温度为180-240℃水解2-10分钟，过滤，收集滤液，得木质纤维素水解液。