[发明专利]家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法及试剂盒

权利要求书

1.家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法，其特征在于，该方法具体为：家蝇体内的乙酰胆碱酯酶AChE作为DDVP的作用靶标，AChE能够分解底物碘代硫化乙酰胆碱ATCh为乙酸和碘化硫代胆碱，利用该碘化硫代胆碱与巯基显色剂5，5-双二硫代DNTB来进行颜色反应，生成黄色络合物5-巯基-2-硝基苯甲酸；当AChE未被抑制即有抗性时，所述颜色反应显示为黄色；当AChE被抑制即敏感时，所述颜色反应显示为无色。

2.如权利要求1所述的家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤为：

1)家蝇粗酶源样品的制备

将羽化后2-3日的家蝇成虫置于-80℃超低温冰箱内设定时间，用镊子取其头部放入离心管中，加入冰冷磷酸缓冲液，匀浆并离心处理后，取上清液作为酶源，保存备用；采用乙酰胆碱脂酶AChE作为阳性对照反应，采用丙酮为阴性对照反应

2)颜色反应

分别取设定量的样品于透明离心管内，加入DDVP丙酮溶液，充分混合、静置，加入Ellman溶液，均匀混合后静置，依据AChE颜色反应原理，通过肉眼观察反应液颜色变化情况；

3)结果判读

溶液显黄色为抗性品系，说明家蝇AChE活性不能被该浓度DDVP抑制；溶液呈无色说明AChE活性被抑制，为敏感品系；同时阳性对照显示黄色，阴性对照显示无色。

3.如权利要求2所述的家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法，其特征在于，所述步骤1)中磷酸缓冲液浓度为25mmol/L，pH＝7.4，含0.1％曲通-100。

4.如权利要求2所述的家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法，其特征在于，所述步骤1)中整个操作在冰上进行。

5.如权利要求2所述的家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法，其特征在于，所述家蝇的敏感品系的AChE抑制时，DDVP的浓度为0.04mg/mL～0.16mg/mL之间。

6.如权利要求5所述的家蝇对DDVP抗药性快速检测的方法，其特征在于，所述家蝇的敏感品系的AChE完全抑制时，DDVP的浓度为0.08mg/mL。

7.一种实施如权利要求1所述方法的家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，包括盒体和取液器，其中盒体中设置有含0.1％曲通-100的25mmol/L磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含0.05mg/mL乙酰胆碱脂酶AChE的阳性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。