[发明专利]冬凌草茎水提物、其制备方法、指纹图谱及作为抗炎剂的应用

说明书

发明领域

本发明涉及冬凌草茎用蒸馏水80℃提取制备水提物、涉及该水提物的HPLC-(-)ESI-Q-TOF-MS/MS指纹图谱、涉及该水提物的HPLC-(+)ESI-Q-TOF-MS/MS指纹图谱、进一步涉及该水提物的在小鼠耳肿胀模型上的抗炎活性及作为抗炎剂的应用。本发明属于生物医药领域。 

背景技术

炎症是一种常见的疾病症状，与感染密切相关。虽然急性炎症是机体对细菌感染的保护性应答，但是慢性炎症是某些重大疾病的前期病变。例如慢性炎症是公认的癌前病变。研究和开发安全有效的抗炎药物，具有明确的应用价值。 

冬凌草(DLC)，是唇形科香茶菜属植物碎米桠Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara的全草。冬凌草为多年生草本植物，广泛分布于我国黄河长江流域，主产于河南济源太行山、王屋山区一带。因具有清热解毒、清咽利喉和消肿止痛功能，民间常年将冬凌草叶当作茶叶煮水饮用。显然，凌草叶的水提物具有抗炎作用。 

在过去的30多年里，冬凌草的化学成分及药理作用研究主要集中在叶的脂溶性部分，代表性成分为冬凌草甲素和冬凌草乙素。虽然冬凌草叶的水提物在民间用于清热解毒、清咽利喉和消肿止痛，但是迄今没有任何与冬凌草茎的水提物用于抗炎的研究见诸文献。与叶相比，冬凌草茎在全草中所占的比例高很多，开发冬凌草茎在医药中的应用具有多方面的意义。 

通过长期的抗炎药物研究积累，发明人锁定酚酸与二萜为具有抗炎活 性的结构类型。通过生源分析发明人预测到冬凌草茎中含丰富的酚酸与二萜。按照这些认识，发明人提出本发明，用HPLC-(-)ESI-Q-TOF-MS/MS指纹图谱和HPLC-(+)ESI-Q-TOF-MS/MS指纹图谱揭示冬凌草茎水提物的化学成分、用小鼠耳肿胀模型揭示冬凌草茎水提物的抗炎作用。 

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种制备冬凌草茎水提物的方法。 

本发明所要解决的第二个技术问题是建立HPLC-(-)ESI-Q-TOF-MS/MS和HPLC-(+)ESI-Q-TOF-MS/MS分析方法，获取冬凌草茎水提物的指纹图谱以便控制冬凌草茎水提物的质量。 

本发明所要解决的第三个技术问题是用小鼠耳肿胀模型揭示冬凌草茎水提物的抗炎作用，为预防癌前病变提供冬凌草茎水提物作为抗炎活性高无副作用的健康物质。 

本发明涉及冬凌草茎水提物的制备工艺，该工艺包括冬凌草茎用热水提取、水提物过滤、滤液减压浓缩至干、得到的干粉用HPLC-(-)ESI-Q-TOF-MS/MS和HPLC-(+)ESI-Q-TOF-MS/MS分析得指纹图谱、得到的干粉用小鼠耳肿胀模型评价抗炎作用。 

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。 

附图说明

图1a冬凌草茎水提物在(-)ESI-Q-TOF-MS检测的离子流指纹图谱 

图1b冬凌草茎水提物在(+)ESI-Q-TOF-MS检测的离子流指纹图谱 

具体实施方式

实施例1冬凌草茎水提物的制备 

40g干冬凌草茎自来水洗净、凉干、切成大约1cm长的茎段、加1000-1800mL温度为70-90℃的热蒸镏水渗滤，优选加1200mL温度为80℃的热蒸馏水渗滤。渗滤液流出的速度为10-30mL/分钟，优选20mL/分钟。流出液于40-60℃减压浓缩，优选于50℃减压浓缩，得到3g冬凌草茎水提物，为淡黄色固体。研成粉末，供后面的研究使用。 

实施例2冬凌草茎水提物的HPLC-(-)ESI-Q-TOF-MS/MS和HPLC-(+)ESI-Q-TOF-MS/MS指纹图谱 

HPLC：Waters 2795 Separations Module； 

Detector：Waters 2489Dual absorbance detector； 

Kromasil C₁₈(Dikma)反相柱(5_μm，250_mm_×_4.6_mm)； 

保护柱(5_μm，10_mm_×_4.6_mm)； 

流动相：乙腈/水(含0.5％和0.05％冰醋酸)； 

流动相流速：0.3ml/min； 

进样量：50μl； 

洗脱方式：梯度洗脱(具体梯度见表1)。