[发明专利]一种快速检测三聚氰胺的一步法酶联免疫检测方法及其试剂盒

说明书

发明领域

本发明涉及酶联免疫和食品非法添加剂残留检测领域。具体而言，本发明涉及一种用于快速检测三聚氰胺的一步法酶联免疫检测方法及其试剂盒。

背景技术

三聚氰胺(Melamine)，分子式C₃N₆H₆，简称三胺，化学名称为2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪，俗称密胺、蛋白精，是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶於丙酮、醚类，广泛应用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气和医药等行业。MEL含氮量极高，不法商贩把廉价的三聚氰胺添加入食品中，以虚假提高食品中的蛋白质含量。2007年3月，美国发生4000多起猫狗中毒死亡事件；2008年9月，我国爆发三鹿婴幼儿奶粉受污染事件，导致食用了受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症甚至死亡，以及2010年初再度爆发的问题奶粉事件，其原因都是饲料或奶粉中含有三聚氰胺。目前欧盟、美国、加拿大、日本和中国都禁止向食品和饲料中人为添加入三聚氰胺，考虑到三聚氰胺也有可能从包装材料中迁移到食品中，为确保人体健康与食品安全，2011年4月6日，卫生部等五部委联合发布2011年第10号公告，规定婴儿配方食品(包括乳及乳制品)中三聚氰胺的限量值为1mg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于上述限量的食品一律不得销售。

因此建立一种快速、灵敏、易行的三聚氰胺快速检测方法以确保食品和饲料安全具有重要意义。目前三聚氰胺的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气-质联用色谱法(GC-MS)和液-质联用色谱法等，检测灵敏度高、准确性好；但这些方法需要有完善的实验室，有经验的技术人员，复杂的仪器设备，且检测过程繁琐，不适应现场大量样本的筛查。基于抗原抗体免疫反应的免疫学检测技术为小分子残留物的分析检测提供了一个新的途径。基于此原理建立的一步法直接竞争酶联免疫检测技术较间接竞争法大大缩短了检测时间。该技术的关键是完全抗原和酶标记抗原的合成及抗体的制备。

目前，未见有国产的三聚氰胺一步法酶联免疫检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测三聚氰胺的一步法酶联免疫检测试剂盒。

本发明提供了一种快速检测三聚氰胺的一步法酶联免疫检测试剂盒，其包括三聚氰胺特异性抗体、三聚氰胺标准品溶液和三聚氰胺酶标记物。其中所述的三聚氰胺抗体为多克隆抗体，优选为兔抗三聚氰胺的多克隆抗体，其是用三聚氰胺与载体蛋白偶联物作为免疫原通过免疫动物例如兔制得；所述的三聚氰胺标准品溶液为三聚氰胺标准品储备液(精确称取100mg三聚氰胺标准品，用超纯水溶解并定容至100mL配制而成)用磷酸盐缓冲液(0.01mol/L，pH 7.4)配制成浓度分别为0、1、3、9、27、81ng/mL；所述的三聚氰胺酶标记物中所用的标记酶为辣根过氧化物酶，所述的三聚氰胺辣根过氧化物酶标记物采用化学方法偶联得到，所述偶联方法为甲醛树脂法。

本发明提供了一种快速检测三聚氰胺的一步法酶联免疫检测试剂盒，该试剂盒包括：包被有三聚氰胺特异性抗体的酶标板和三聚氰胺辣根过氧化物酶标记物工作液。其中三聚氰胺特异性抗体为兔抗三聚氰胺的多克隆抗体，其是用三聚氰胺与载体蛋白偶联物作为免疫原通过免疫动物例如兔制得；所述的三聚氰胺辣根过氧化物酶标记物采用化学方法偶联得到，标记酶为辣根过氧化物酶，所述偶联方法为甲醛树脂法。

用于制备所述酶标板的固相材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯。载体的形式是微量反应板凹孔。