[发明专利]一株高产褐藻酸裂解酶的嗜盐白蚁菌及其应用方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株高产褐藻酸裂解酶的嗜盐白蚁菌(Isoptericola halotolerans)及其应用方法。

背景技术

褐藻寡糖具有多种生物活性，其药用价值的研究已成为新的热点，具有良好的抗肿瘤活性和抗凝活性，副作用小，可降血糖血脂，并且对人的遗传性高血糖也有明显疗效，同时可以防止高胆固醇血症的形成，有降脂、维护心血管正常功能的作用。目前，生产褐藻寡糖的方法可归纳为：化学降解法、物理降解法和酶解法。但前两者降解速度慢，会破坏多糖的特有的结构，且需高温、高压，条件复杂不易控制，而酶解法条件温和，得率高达100％，因此在褐藻寡糖的生产方面倍受到重视，使得后者的医药作用充分得到实现。此外，褐藻酸裂解酶作为一个重要的海洋生物酶，可以配合一些抗生素降解肺囊性纤维化病人肺中绿脓杆菌产生的褐藻胶，抑制绿脓杆菌的生长繁殖，也可作为海藻解壁酶从褐藻或红藻中分离DNA、原生质体和单胞藻，为新药、新功能食品的开发提供新的手段。依靠富集褐藻附生菌筛选产酶菌株是我国现阶段获得褐藻酸裂解酶的主要手段。微生物褐藻酸裂解酶主要来源于海洋细菌、真菌等，但是由于受到海洋特殊生长环境的影响，这些褐藻酸降解菌种的产酶性状不稳定。因此，寻找性状稳定、易于培养的高产的褐藻酸裂解酶菌株具有重要意义。而相关研究，国内外尚未文献报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有褐藻酸裂解酶的生产方法中的技术难点及存在的问题，提供一株新型的高产褐藻酸裂解酶的嗜盐白蚁菌，利用该菌株发酵可生产高酶活力的褐藻酸裂解酶，该菌株是极具有开发研究价值的褐藻酸裂解酶的生产菌株。

发明内容

本发明的发明人从国内生产褐藻酸钠的化工厂取得土样与废料样品，分离筛选获得一株产褐藻酸裂解酶的新型嗜盐白蚁菌WX，并对这株菌进行了发酵研究。根据形态特征和生理生化特性，将其鉴定为Isoptericola halotolerans，编号为WX。该菌于2011年10月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5336。

本发明提供的嗜盐白蚁菌WX的形态特征与生理生化特征为：

该菌株形态呈短杆状，或似球形，革兰氏染色阳性；在平板上培养48h的菌落呈浅黄色，圆形微凸、表面光滑、菌苔湿润、菌落较小，但透明圈明显；单个、成对或短链状排列，无鞭毛，无孢子形成。最适温度为25℃，最适pH为8.0。可在20％的NaCl、pH为10的培养基中生长。接触酶呈阳性，氧化酶呈阴性，M.R、V.P反应为阴性，可利用葡萄糖、乳糖、甘露醇等，不能利用果糖、甘油等；不能水解淀粉，但可以缓慢水解明胶；具有硝酸盐还原性，可水解纤维素。生理生化特征见表1

表1

本发明提供的嗜盐白蚁菌WX是具有良好前景的产褐藻酸裂解酶的新型生产菌株，该菌株可在自制培养基中生长。自制培养基配方为：褐藻酸钠6g/L，蛋白胨5-20g/L，酵母粉4-10g/L，NaCl 20-30g/L，MgSO₄ 2mM，CaCl₂ 0.5mM，KH₂PO₄ 1mM，FeSO₄ 0.2mM，MnSO₄ 0.3mM，琼脂粉10-20g/L；补充蒸馏水至1L，灭菌前调培养基的pH至7.5-8.0，在121℃高压蒸汽下灭菌20min。

上述的嗜盐白蚁菌WX可以采用发酵法生产褐藻酸裂解酶，其步骤如下：

1)采用保藏号为CGMCC No.5336的嗜盐白蚁菌WX为生产菌种，按照常规方法进行活化培养得到种子液，将该种子液涂布到自制培养基上；

2)制备的嗜盐白蚁菌WX菌株的细胞液体培养物：挑取步骤(1)的自制培养基上的嗜盐白蚁菌WX一环，接种于装有20-50mL培养基的250mL锥形瓶中，培养温度为25-30℃，置摇床上以180-230r/min的转速培养20-24h至对数生长中期，即得到嗜盐白蚁菌WX菌株的细胞液体培养物；