[发明专利]一种猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株及制备方法

权利要求书

1.一种猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株，其特征在于：猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型XT(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2XT)，CCTCC NO：M2011410。

2.权利要求1所述的一种猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型XT菌株的制备方法，其步骤是：

A、按配方称取酵母粉20～30g/L、葡萄糖3～5g/L、谷氨酸钠1～3g/L、K2HPO4 2～5g/L、NaH2PO4 0.5～2g/L、MgSO4 0.5～1g/L、FeSO4·7H2O 0.05～0.1g/L、辅酶I 0.01～0.03g/L，将除NaH2PO4、K2HPO4、辅酶I之外的其他组分，溶入900ml纯水中，调节pH值到7.4±0.2，115℃下灭菌25min；

B、将NaH2PO4、K2HPO4配成10倍浓度母液，121℃下灭菌15min后，取100ml；

C、将辅酶I配成1000倍浓度母液，0.2μm孔径滤膜过滤后，取1ml；

D、将上述步骤A、B、C得到的溶液混合，即得到所述的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型XT高密度发酵培养基；

进一步在100L发酵罐中对猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型XT在培养基中的生长控制条件进行控制摸索，其条件是：

a、将冻干种子菌用添加有NAD的TSA平板37℃活化18～24h，至单菌落长出；

b、挑取单菌落至添加有NAD的TSB摇瓶种子培养基中，培养6～8h至OD600值达到0.4～0.6；

c、以3％～5％接种量将培养好的种子液转接到装液系数为70％的培养基发酵罐中；

d、发酵初期100r/min搅拌，通气量控制在1800L/h，温控为恒温37℃；

e、发酵2h后，提高转速到200r/min，通气量到3000L/h，并在线补加NH3控制pH在7.0；

f、发酵10h，观察到NH3停止补加且溶氧DO值回升到80以上时，放罐收菌。