[发明专利]一种豌豆天冬氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法

权利要求书

1.一种豌豆天冬氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，其特征在于：采用豌豆研磨成粉，用水浸提，高速离心，上清液进行热处理，再高速离心，上清液通过DEAE-52离子交换层析得纯化的天冬氨酸蛋白酶抑制剂，再经过真空冷冻干燥得天冬氨酸蛋白酶抑制剂干粉；其工艺为：

A豌豆上清液的制备：

（1）豌豆：市售；

（2）水浸提：豌豆研磨成粉后，与水按g/mL计 1: 4在4℃下进行浸提2 h，浸提后以8000 r/min、4℃下离心30 min，取上清液；

（3）热处理：将上清液进行60℃下水浴20 min，8000 r/min、4℃下离心30 min，取上清液；

B分离天冬氨酸蛋白酶抑制剂：

（4）离子交换层析：DEAE-52离子交换色谱柱规格为30 cm×2.2 cm，平衡缓冲液为pH 6.8、10 mmol/L的磷酸钠缓冲液；洗脱模式：以平衡缓冲液洗脱2倍柱体积后，再以平衡缓冲液依次加含不同浓度 0.2，0.4，0.6，0.8 mol/L NaCl的磷酸缓冲液进行阶段洗脱，流速为1.5 mL/min，进样量为20 mL，280 nm波长紫外检测，收集含 0.2 mol/L NaCl的磷酸缓冲液梯度下洗脱的峰液；

（5）干燥成粉：将DEAE-52 离子交换层析中以含0.2 mol/L NaCl的磷酸缓冲液梯度洗脱收集的峰液进行冷冻干燥，即得天冬氨酸蛋白酶抑制剂干粉。