[发明专利]一种烟草HPLC指纹图谱数据库的建立方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于烟草品质分级技术领域，具体涉及一种烟草HPLC指纹图谱的分析方法及在烤烟质量分析、烤烟品牌识别和打叶配方中的用途。

技术背景

指纹图谱系指将分析对象经适当处理后，采用一定的仪器分析手段得到的能够标示该对象特性的共有峰的图谱。指纹图谱技术具有模糊指纹特征分析、宏观推断分析等特点，是进行复杂物质质量评价的有效手段。指纹图谱技术已经成功地应用于中药品质分析和判断及农产品朔源等领域。鉴于此，近年来，一些研究者对指纹图谱技术在烟草科研与生产上应用的理论和实践问题进行了有益的探索。

经检索，中国发明专利中指纹图谱应用的发明专利申请涉及烟草和中成药鉴定等多个方面。经检索目前的相关专利文献如下：

申请号为200810196806.7文献涉及一种烤烟醇化品质判定的高效液相指纹图谱分析方法。它是采用高效液相色谱分析方法测定不同烟叶样品，得出烟叶指纹图谱特征峰，然后利用中草药指纹图谱软件对特征峰进行分析，建立指纹图谱特征峰总面积与烟叶样品感官质量的回归关系模型；以感官质量为依变量y，指纹图谱总面积x 为因变量，建立两者的回归关系模型为：Y＝72.04974+0.1388*LN(X)*LN(X)或 Y＝X/(0.011081*X+13.247)；根据所测样品的指纹图谱总面积X，计算出感官质量Y。本发明具有准确性高、稳定性好的特点，实际操作中可节省大量的人力物力财力，使用方便，能够代替利用传统的感官评吸方法对烟叶醇化质量的判定。

申请号为200810196807.1文献涉及一种烤烟醇化品质判定的高效液相指纹图谱主成分分析方法。它是采用高效液相色谱分析方法测定不同烟叶样品，得出烟叶指纹图谱特征峰，然后利用中草药指纹图谱软件对特征峰进行分析，建立特征峰主成分值与烟叶样品感官质量的回归关系模型；以感官评吸值Y为依变量，7个主成分值A1 至A7为因变量，建立特征峰主成分值与感官评吸值的多元回归模型：

Y＝85.64+1.34A1+1.21A2+0.27A3-0.40A4-1.17A5-0.46A6+0.48A7

根据分析所得到的主成分值A，计算出感官质量Y。具有准确性高、稳定性好的特点，实际操作中可节省大量的人力物力财力，使用方便，能够代替利用传统的感官评吸方法对烟叶醇化质量的判定。

申请号为01119925.3的文献涉及中药丹参水溶性提取物HPLC指纹图谱建立的方法及其标准指纹图谱。首先制备供试品溶液，取丹参药材粉末(过30目筛)4.00g，加水50ml，精密称重，回流提取2小时，放冷至室温，补足失水，取2ml置25ml量瓶，甲醇定容至刻度，离心，取上清液作为供试品溶液。再配制对照品溶液，取丹参素钠、原儿茶醛对照品适量，用流动相稀释，制成每1ml中含丹参素钠20μg，原儿茶醛5.0μg，作为对照品溶液。测定法是分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20μl、10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，计算，即得。建立丹参标准指纹图谱。将待测丹参样品指纹图谱与标准指纹图谱对比，比较其异同。本发明的优点是方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握，能从色谱的整体特征面貌上把握丹参的品种和质量情况，可将其作为丹参质量控制及真伪鉴别的指标之一。

申请号为03147783.6文献涉及一种使用高速逆流色谱(HSCCC)制订中药指纹图谱的方法。该方法包括制备各批次中药材的粗提物；通过TLC确定主要化合物类型；选取HSCCC使用的溶剂体系；使用高速逆流色谱仪纯化中药材的粗提物；使用紫外检测器检测洗脱液，绘制各组份的紫外吸收与洗脱时间的关系图；通过HPLC和UV-Vis确定粗提物中各组份的对应性；判断共有指纹峰；综合中药指纹图谱方法学考察资料的数据即构成指纹图谱。该法首次将HSCCC应用于中药指纹图谱的制订，是对现有方法的重要补充，其精密度和重现性明显优于TLC，又解决了HPLC难以分析/分离高粘度和易填料吸附的样品以及仪器耗材昂贵的问题。

申请号为200410066701.1文献涉及一种中药指纹图谱的制作方法，是一个用裂解-气相色谱-质谱联用技术来制作中药指纹图谱的方法，该方法包括下列三步步骤：1、中药材的裂解；2、GC/MS分析；3、计算机处理，获得标识混合体系的彩色二维条形码，即是使得计算机能够识别中药的指纹图谱。通过对同一药材或不同药材的标准谱图进行精确的类似度比较，根据类似度的大小，人们可对中药材进行鉴别。因而本发明制作方法可用来快速有效地鉴别中药材，控制中药材的质量，为提高中药生产现代化程度提供一个重要的手段。