[发明专利]一种黑色玉米须多糖的提取工艺

说明书

技术领域：

本发明属于天然植物的提取工艺这一技术领域，特别属于黑玉米须多糖的工艺这一技术领域。

背景技术：

玉米须是禾本科作物玉米的干燥花柱和柱头，具有消肿、利尿、平肝和利胆之功效，用于治疗高血压、糖尿病、肾炎性水肿、湿热黄疸、胆结石等病症。玉米须中多糖含量高达4～5％，是玉米须主要活性成分之一。据大量文献报道，玉米须多糖具有调节血糖、抑制肿瘤生长、调节机体免疫及抗氧化等多种功能特性。我国素有逢黑必补的养生理念，目前黑色玉米在市场倍受青睐，研究表明黑玉米营养含量明显高于其他谷类作物，其中黑玉米秆含糖量就达到11.95％，比普通玉米秆高1～3倍。但到目前为止，黑玉米须多糖的提取工艺和功能研究未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种纯度好，回收率高的黑玉米须多糖的提取工艺。

本发明解决技术问题的技术方案为：一种黑玉米须多糖的提取工艺，包括粗提过程，脱蛋白过程，脱色过程，分级及纯化过程。

所述的粗提过程包括粉碎过筛工序，脱脂、水浸提工序，超声波提取工序：

所述的脱脂工序为：将粉碎好的黑玉米须中加入石油醚，在60-65℃回流1h，冷却至室温，挥干溶媒，得到粉渣；黑玉米须与石油醚的重量体积比为(g/ml)＝1∶3。

所述的水浸提工序为，将脱脂工序得到的粉渣加入蒸馏水与蛋白酶K于40-55℃，浸提1.0小时，得到浸提液；黑色玉米须粉末与蒸馏水的重量比为1∶20。蛋白酶K与黑玉米须原料的重量比为0.5-1.5∶200；

所述的超声波提取工序：将浸提液于55-60℃以25-35kHz的超声波提取45分钟，离心，收集上清液；上清液经减压浓缩后，依次用95％乙醇、无水乙醇、乙醚洗2-3次、将沉淀在-65℃真空冷冻干燥至恒重，得黑色玉米须粗多糖。

加入蛋白酶K的目的是为了破坏细胞膜结构，有利于多糖的溶出，也有利于下一步色素和蛋白质的除去。

所述的脱蛋白工序为Sevage法与三氯醋酸法交替脱蛋白，再将脱蛋白后的多糖装入直径22mm，截留相对分子质量为3500的透析袋中，蒸馏水流水透析48小时，得到脱蛋白后的黑色玉米须粗多糖；若单独使用Sevage法或与三氯醋酸法，将会导致脱蛋白次数多，且脱不完全的不利后果。

所述的脱色工艺为：在脱蛋白的黑色玉米须粗多糖中加入体积浓度为90％乙醇或10％过氧化氢，于55-75℃，振摇1小时，再静置2小时，得到脱色的黑色玉米须混合多糖；脱蛋白的黑色玉米须粗多糖与体积浓度为90％乙醇或10％过氧化氢的重量体积比(g/ml)为1∶10。

脱色的基本思路是黑玉米须中的色素等物质多为花色苷类，可溶于乙醇，但多糖不溶于乙醇，因此经振摇后静置可将色素除去，少量未去除的色素进一步经过氧化氢氧化脱色。

分级与纯化工序采用DEAE-纤维素(氯型)柱层析方法。具体为：以DEAE-纤维素为填料，离子交换树脂与已脱色和脱蛋白后的黑色玉米须混合多糖的质量比为20∶1，以离子强度为0-2mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，收集单一峰，于压力0.08-0.1MPa，温度40-60℃减压浓缩0.5-2小时，再将浓缩的多糖装入直径22mm，截留相对分子质量为3500的透析袋中，蒸馏水流水透析48小时，依次用95％乙醇、无水乙醇、乙醚洗2-3次，在-65℃真空冷冻干燥至恒重，得到黑色玉米须纯多糖。

本发明与现有技术相比，黑色玉米须多糖的分离纯化属于首次研究，主要涉及到多糖的提取以及脱色方式不同，采用该方法得到的多糖回收率高、纯度高，色泽好。并且该混合多糖具有预防某些癌细胞生长、降血脂作用。

附图说明

图1为黑玉米须多糖在二乙胺基乙基纤维素柱上的洗脱图谱，表明黑玉米须多糖为两种多糖的混合多糖。

图2为黑玉米须多糖的红外吸收曲线，表明所提取的物质为多糖类。

图3为黑玉米须多糖的紫外可见吸收曲线，表明脱蛋白后的多糖已基本不含蛋白质。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作详细的说明。

实施例1：

黑玉米须多糖纯度的计算方法为：y＝0.0113x-0.0417，R²＝0.9991，式中x多糖的百分含量，y为多糖液的苯酚-硫酸反应在490nm处的光吸收值。