[发明专利]一种血清多肽及以其作为定量参比物的质谱半定量方法

权利要求书

1.一种血清多肽，其质核比为m/z4466-4469。

2.以权利要求1所述的血清多肽作为定量参比物的质谱半定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)血清经过免疫学方法处理；向血清样品中加入适量PBS缓冲液，然后与含有多肽抗体的固相载体混合，固相载体经乙酸洗脱后，离心取上清液；

其中，所述固相载体为包被蛋白G或蛋白A的琼脂糖颗粒；所述多肽抗体为抗多肽5抗体或抗多肽6抗体，其中多肽5和多肽6的氨基酸序列分别为：NLGHGHKHERDQGHGHQ、NLGHGHKHDRDHGHGHQ；

2)采用高通量的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对步骤1)处理后的上清液进行检测；

3)根据质谱检测结果计算得出标志物峰相对于参比物峰的相对强度，并将其作为反映血清中标志物含量的指标；

其中，作为参比物的是权利要求1所述的血清多肽。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，血清经过免疫学方法处理为：取15-25μL固相载体置于Eppendorf管中，加入1.5μg-24μg多肽抗体，4℃混合5分钟-4小时，放置1-5min，移出上清液，用0.01MpH7.4的PBS缓冲液清洗所得固相载体沉淀2-5次，每次PBS缓冲液用量为100-200μL；将10-40μL血清样品和10-50μL上述PBS缓冲液与清洗后的所述固相载体混合，4℃旋转混合8-24h；放置1-5min，移出上清液，用上述PBS缓冲液清洗沉淀2-5次，每次PBS缓冲液用量为100-200μL；加入10-15μL5％乙酸洗脱液，吸排混合1-5min；离心，取上清液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，血清经过免疫学方法处理为：取20μL固相载体置于0.2mL Eppendorf管中，加入1.5μg-24μg多肽抗体，4℃，转速5rpm混合15分钟，放置1-5min，移出上清液，用0.01M pH7.4的PBS缓冲液清洗所得固相载体沉淀3次，每次PBS缓冲液用量为100μL；将10μL血清样品和30μL上述PBS缓冲液与清洗后的所述固相载体混合，4℃旋转混合8h；放置1-5min，移出上清液，用上述PBS缓冲液清洗沉淀3次，每次PBS缓冲液用量为100μL；加入10μL 5％乙酸洗脱液，吸排混合2min；离心，取上清液。

5.根据权利要求2-4任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采用权利要求2-4任一项所述的免疫学方法处理血清，得上清液；

2)采用高通量的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对步骤1)处理后的上清液进行检测，检测次数为n；

其中，n为≥1的整数；

3)根据n次质谱检测结果得到的参比物峰高X_r的算术平均数除以待定量标志物峰高X_m的算术平均数，即得计算标志物的相对含量。