[发明专利]一种分离纯化草胡椒素B的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种分离纯化草胡椒素B的方法。

背景技术

草胡椒属又称为椒草属(Peperomia Ruiz et Pav.)是胡椒科(piperaceae)第二大属。据《中华本草》记载，草胡椒属草药多性凉，具有清热消肿、祛瘀散结、祛风除湿及愈伤止血等功效，主治关节炎、肿瘤、跌打损伤和支气管炎等。经研究发现草胡椒素B(peperomin B，式1)具有较好的抑制肿瘤的活性，可从草胡椒属多种植物如石蝉草(Peperomia dindygulensis Miq.)中分离得到。

式1

提取草胡椒素B的工艺中，现有文献《Bioactive Secolignans from Peperomia dindygulensis》(Jian-lin Wu，ect.，J.Nat.Prod.2006，69：790-794)报道，可从1.75Kg石蝉草中分离得到草胡椒素B79.7mg。其方法为，将药材粉碎，用甲醇提取3次，之后再用乙酸乙酯萃取，再将乙酸乙酯部位通过正相硅胶柱，分为12个部位，第7个部位的3.25g通过正相制备液相色谱分离，得到草胡椒素B79.7mg，其收率为2.45％(79.7mg/3.25g×100％)。

现有专利《一种分离提纯草胡椒素B的方法》(杨国红，王奇巍，林梦感等，200910049488.6，2010)报道，可从10Kg石蝉草中分离得到草胡椒素B13.2g。其方法为，将药材粉碎，用甲醇提取，之后用氯仿萃取，再将氯仿部位通过正相硅胶柱得草胡椒素B粗品22g，取4g通过中低压制备液相色谱分离，得到草胡椒素B2.4g，其收率为62.5％。(2.4g/4g×100％)

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于：为了克服现有的提纯草胡椒素B方法的过程复杂、产品纯度低、成本高、不适用于工业化生产和污染环境等缺陷，而提供了一种分离纯化草胡椒素B的方法。本发明的方法，分离速度快、产品纯度高、对环境污染小、生产成本低，适合于工业化生产。

本发明提供了一种分离纯化草胡椒素B(peperomin B，式1)的方法，其包括下列步骤：将含草胡椒素B的水提液上样至大孔吸附树脂，以乙醇和水作为洗脱剂进行梯度洗脱，收集含草胡椒素B的洗脱液，即可；所述的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂；所述的梯度洗脱所用的洗脱剂的浓度范围为纯蒸馏水至95％乙醇水溶液(体积百分数)。

本发明中，所述的含草胡椒素B的水提液可从含有草胡椒素B的植物原料中提取所得，较佳地从含有草胡椒素B的植物原料中提取所得。其中，所述的含有草胡椒素B的植物原料较佳地为草胡椒、豆瓣绿、山草椒和毛豆瓣绿中的一种或多种，更佳地为石蝉草。

其中，所述的含草胡椒素B的水提液可由本领域常规的制备方法制得，较佳地包括下列步骤：将含有草胡椒素B的植物原料用水在回流条件下进行提取，合并提取液，抽滤，即可。其中，所述的水的用量可为含有草胡椒素B的植物原料的12～16倍量(质量倍数)，更佳地为含有草胡椒素B的植物原料的12倍量(质量倍数)；所述的提取次数较佳地为3～5次，更佳地为4次；所述的提取时间较佳地为每次0.5～1h，更佳地为每次0.5h；所述的抽滤较佳地为减压抽滤；所述的抽滤次数为直到滤液中不再有滤渣(药渣)为止，较佳地为1～2次，更佳地为2次。所述的含草胡椒素B的水提液的比重范围较佳地为1.002-1.020，更佳地为1.005。

本发明中，所述的上样的方法为本领域常规的上样的方法，较佳地为湿法上样。当上样方法为湿法上样时，其步骤为本领域常规的上样步骤，较佳地按如下步骤操作：将含草胡椒素B的水提液，直接上样；所述的上样速度较佳地为1～3BV/h，更佳地为2BV/h。

本发明中，所述的弱极性大孔吸附树脂，较佳地为DS401或HPD722等；所述的非极性大孔吸附树脂，较佳地为DM130，HPD100，HPD200或HPD300等。

本发明中，所述的大孔吸附树脂的用量可为本领域常规大孔吸附树脂的用量，其与含草胡椒素B的水提液的体积比较佳地为1∶20～30，更佳地为1∶25，其中，含草胡椒素B的水提液中草胡椒素B的含量一般为4mg/L。

本发明中，所述的大孔吸附树脂柱的径长比可为本领域常规的大孔吸附树脂柱的径长比，较佳地为1∶8～1∶12，更佳地为1∶9。