[发明专利]多能扩增间充质前体细胞子代(MEMP)及其应用

说明书

本申请是申请日为2005年9月26日，发明名称为“多能扩增间充质前体细胞子代(MEMP)及其应用”，申请人为成血管细胞系统公司，申请号为：2005800402121的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及多能扩增的间充质前体细胞子代(MEMP)。本发明还涉及用于产生MEMP的方法以及MEMP在治疗性应用中的用途。

背景技术

存在于体内且分离时可产生多能细胞的非造血祖细胞被称为间充质前体细胞(MPCs)。更具体地，纯化的MPCs能够形成大量多能细胞集落。

Simmons等人(Advances in Bone Marrow Purging and Processing：Fourth International Symposium，pages 271-280，1994)阐述了通过选择表达STRO-1细胞表面标记物的细胞，从新鲜收集的骨髓细胞富集MPCs。如作者在第272-273页所解释的，已知骨髓细胞包含一定比例能够产生CFU-F的MPCs。这些CFU-F在合适的条件下又能够产生多种(a broad spectrum of)完全分化的结缔组织，包括软骨、骨、脂肪组织、纤维组织和骨髓支持基质(myelosupportive stroma)。

MPCs和CFU-F通常以非常低的发生率存在于骨髓细胞中(通常在0.05％-0.001％之间)，并且这种稀缺性一直是其过去研究中的主要限制。在Simmons et al，1994(见前)引文中所论述的重要发现证实可以通过选择STRO-1阳性细胞，从新鲜分离的骨髓细胞中一定程度的富集MPCs。特别地，STRO-1阳性细胞的选择使得分离MPCs(以及得到的CFU-F)而不污染造血祖细胞成为可能。

WO 01/04268(Simmons et al.)通过鉴定STRO-1阳性细胞部分内包含MPCs的亚群，提供了另一个在MPCs富集方面非常重要的进展。特别地，WO 01/04268描述了将STRO-1阳性细胞群分选为三个亚类：STRO-1^暗、STRO-1^中间和STRO-1^亮。在不同的分选亚群中进行CFU-F集落形成(clonogenic)测定，表明绝大多数MPC包含于STRO-1^亮部分中。

WO 2004/085630(Gronthos et al)首次披露了MPCs存在于血管周围组织中。这个发现的一个益处在于它极大地扩展了MPC可以从其分离或富集的源组织的范围，并且不再存在对MPCs的骨髓来源的有效限制。根据WO2004/085630中描述的方法，MPCs可以从其分离的组织包括人类骨髓、牙髓、脂肪组织、皮肤、脾、胰腺、脑、肾、肝脏和心脏。从血管周围组织分离的MPCs对于细胞表面标记物3G5是阳性的。因此，它们可以通过富集携带3G5标记物的细胞、或者通过富集存在于血管周围细胞上的早期发育表面标记物(如CD146(MUC18)、VCAM-1)、或通过富集高水平表达的细胞表面标记物STRO-1来分离。

用于体外繁殖分离的MPC的方法已有描述(Gronthos et al.Journal of Cell Science 116：1827-1835，2003)。然而，普遍接受的观点是：MPC的体外扩增通过分化使其祖细胞本质丢失。

发明内容

现在，本申请的发明人得到了令人惊奇的发现，即，体外扩增的MPCs能产生一种保留多能性的子代亚群。这种MPC子代亚群为Stro-1^bri细胞并在本文中被称为多能扩增MPC子代(MEMPs)。

本申请的发明人还得到了令人惊奇的发现，即MEMPs在体外和体内均能够刺激组织特异性定型细胞(TSCCs)的增殖。因此，MEMPs在多种需要产生或修复组织的治疗性应用中具有潜在用途。

因此，本发明提供了富集细胞群体，其中总细胞群体的至少10％为具有STRO-1^bri、ALP^-表型的多能扩增间充质前体细胞子代(MEMPs)。

本发明还提供了包括培养的和/或扩增的细胞群体的组合物，其中总细胞群体的至少1％为具有Stro-1^bri、ALP^-表型的MEMPs，并且其中组合物进一步包括主要为一种组织类型的TSCCs。