[发明专利]一种快速诊断A族链球菌的诊断试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属于诊断试剂领域，具体说是提供一种快速诊断A族链球菌的诊断试剂及其应用。

背景技术

随着人们日常生活水平的提高，大多数发达国家都非常重视临床用药的依据，尤其在合理使用抗生素方面特别重视。自本世纪初开始，他们就已经逐步开始使用快速诊断技术对上呼吸道感染的门诊病人进行A族链球菌病原的筛查。到目前为止，已经稳固地建立了此法在临床检测当中的重要地位。

免疫层析技术应用于快速诊断A族链球菌，最早研究开始于上世纪80年代中期，到90年代中后期开始逐渐用于临床领域，到本世纪初已经开始正式进入临床市场。在过去的 5年之内在美国、欧洲、日本等少数发达国家的应用得到快速发展。在临床上利用其快速诊断A族链球菌干扰并指导合理使用抗生素的作用已经得到广泛认可。其主要品牌Clearview 、OLA. 、SsA 、Roche 、  Diaquick等。

A族链球菌快速诊断试剂是一种采用免疫层析检测技术特异抗原的技术。免疫层析检测技术(Lateral Flow Immunoassay)，其应用在临床快速诊断领域,其原理是借助毛细作用，样品和着色标记在硝酸纤维膜(NC)上泳动,其中的待测物或标记物与NC膜上一定区域(测试区)的配体结合，从而将无色的抗原抗体反应变为显色反应，并在短时间内(5或10分钟)便可以得到直观的结果。

国内市场起步晚，产业化发展长期滞后，与国外公司相比，差距较大，但发展势头很好，目前国内临床诊断试剂市场规模已经发展到每年30亿～40亿元人民币的销售额，据专家估计未来5年里 ，国内临床诊断市场的年增长率高达15%～20%。

目前国内外的快速诊断技术大多是基于免疫诊断的机理，即需通过抗原抗体的特异性结合，这个过程中就需要大量高程度、高敏性和特异性良好的单克隆抗体。但长期以来，单克隆抗体的制备及大规模纯化技术等一些抗体工程关键技术被国外厂家所掌握，使得我国的生物技术企业，尤其是生产免疫诊断试剂（盒）及相关产品的企业不得不大量依赖于进口原料，而进口原料的价格又非常昂贵，以单克隆抗体为例，每克进口价约50～100万元。不仅如此，有些原料还被国外厂商所垄断，如果向其购买，所生产出的产品必须贴牌并归其销售，企业无法建立自有品牌，也无法迅速扩大知名度、抢占市场，极大地制约了我国生物技术企业的进一步发展。因此，建立具有自主知识产权的抗体表达及下游相关技术，为相关生物技术企业提供大量可靠的诊断试剂原料以替代进口，不仅可降低生产成本，产生可观的经济效益，同时也对相关企业及相关行业的发展非常有利。

发明内容

针对上述现有技术存在的缺点和不足，本发明的目的是提供一种快速诊断A族链球菌的诊断试剂，此诊断试剂不需要将结合标记物与自由标记物的分离，省去烦琐的加样、洗涤或者病原体培养步骤，操作简便、快速，人员不需要复杂的培训，不需要仪器，检测成本低，非常适用于临床上快速筛选A族链球菌病原体。

为实现本发明目的，发明人提供如下技术方案：

一种快速诊断A族链球菌的诊断试剂，是一种单抗菌液，所述的单抗菌液按下述方法制备，包括以A族链球菌StrepA为原料菌液，再经原料菌液复苏、放大培养、菌种灭活、离心和洗涤得到单抗菌液。

作为优选，根据本发明所述的一种快速诊断A族链球菌的诊断试剂，其中，所述的单抗菌液按下述方法制备：

（1）原料菌液复苏

取解冻后的A族链球菌StrepA菌液0.5-0.8毫升接种于12毫升的Todd Hewitt broth培养基中，置于37℃、180rpm的恒温摇床中，培养20-22小时，直至出现絮状沉淀；

取上述得到的菌液0.5-0.8毫升接种于22毫升的Todd Hewitt broth培养基中，置于37℃、180rpm的恒温摇床中，培养20-22小时，直至出现絮状沉淀；

（2）放大培养

将步骤（1）得到的菌液，以1:32-1:42比例加入到Todd Hewitt broth培养基中，于37℃、110-220rpm下培养18-24小时；经恒温水浴灭活；

（3）菌种灭活、离心和洗涤

将步骤（2）得到的菌液灭活后以6000-7000rpm，离心15-30分钟，倒去上清，沉淀用磷酸盐缓冲生理盐水洗涤，再在6000-7000rpm下离心15-30分钟，重复洗涤、离心数次后用磷酸盐缓冲生理盐水溶液沉淀，搅拌直至充分混匀，得到所述的快速诊断A族链球菌的单抗菌液。