[发明专利]一种生血宁片的高效液相色谱指纹图谱及制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药生血宁片的高效液相色谱指纹图谱及其建立方法和用途，属于中药领域。

背景技术

生血宁片是武汉联合药业有限责任公司独家生产的一种中成药，其有效成分来自于中药蚕砂的提取物，该药具有益气补血的功效，可用于治疗缺铁性贫血。生血宁片原有药品标准是通过薄层法进行定性鉴别，但因该方法专属性差，无法对药品质量进行有效监控。

指纹图谱技术是色谱技术发展的更高阶段，被越来越多应用于复杂化学成分的鉴定工作中。在中药领域，将中药(或中成药)提取物经色谱分析后能得到一张色谱图，虽然目前尚不能说明图上每个色谱峰的归属，但至少可以证明其对应成分的存在，于是由这些色谱峰就构成了被检中药的内在质量，由于每一种中药的内在成分谱是相对固定的，而不同中药的成分谱又是绝对不同的，因而将被检样品指纹图谱与产品标准指纹图谱进行比对，即可对被检产品的真伪或优劣做出评价。

由于中药成分复杂，且其中的大部分成分还是未知的，这给指纹图谱技术在中药鉴别领域的应用造成了一定的困难。加之为产品建立专属指纹图谱需要丰富的经验和创造性劳动，因而除中药注射剂(成分谱相对简单)外，在中成药中使用指纹图谱的成功案例极为少见。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种生血宁片的高效液相色谱指纹图谱；本发明的另一目的是提供使用该指纹图谱鉴定生血宁片的方法。

本发明目的一所述的指纹图谱是通过以下技术方案得到的：

A、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2％甲酸溶液为流动相A，以体积比为50∶50∶5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为392nm；

B、供试品溶液的制备：取供试品粉末0.2～0.3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

C、测定法：精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，获得指纹图谱。

上述技术方案中，在进行梯度洗脱时流动相优选按以下方式混合：

  时间(min)  流动相A  流动相B  0  55％  45％  60  5％  95％  65  5％  95％

如供试品是生血宁片，则按上述技术方案得到的指纹图谱中应至少有10个特征峰，它们以二氢卟吩e6的吸收峰(5号峰)为参照，得到的相对保留时间依次为：1号峰0.310～0.380，2号峰0.350～0.415，3号峰0.480～0.550，4号峰0.635～0.715，5号峰1.000，6号峰1.065～1.095，7号峰1.225～1.265，8号峰1.430～1.505，9号峰1.535～1.630，10号峰1.610～1.690。

指纹图谱中的10个特征峰除了相对保留时间符合上述要求外，以二氢卟吩e6的吸收峰面积为参照，各峰的相对峰面积依次应为：1号峰1.24～1.51，2号峰2.35～2.70，3号峰2.33～2.90，4号峰0.39～0.84，5号峰1.00，6号峰0.26～0.43，7号峰0.77～1.43，8号峰0.37～0.69，9号峰0.19～0.36，10号峰0.14～0.32。