[发明专利]一种生血宁片的高效液相色谱指纹图谱及制备方法和用途

权利要求书

1.一种生血宁片的高效液相色谱指纹图谱，其特征在于该图谱是按如下方法生成的：

A、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2％甲酸溶液为流动相A，以体积比为50∶50∶5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为392nm；

B、供试品溶液的制备：取供试品粉末0.2～0.3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

C、测定法：精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，获得指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的指纹图谱，其特征在于进行梯度洗脱时流动相的混合方式为：0分钟时，流动相A为55％，流动相B为45％；60分钟时，流动相A为5％，流动相B为95％；65分钟时，流动相A为5％，流动相B为95％。

3.根据权利要求1或2所述的指纹图谱，其特征在于该图谱中至少有10个特征峰，它们以二氢卟吩e6的吸收峰为参照，得到的相对保留时间依次为：1号峰0.310～0.380，2号峰0.350～0.415，3号峰0.480～0.550，4号峰0.635～0.715，5号峰1.000，6号峰1.065～1.095，7号峰1.225～1.265，8号峰1.430～1.505，9号峰1.535～1.630，10号峰1.610～1.690。

4.根据权利要求3所述的指纹图谱，其特征在于10个特征峰以二氢卟吩e6的吸收峰为参照，得到的相对峰面积依次为：1号峰1.24～1.51，2号峰2.35～2.70，3号峰2.33～2.90，4号峰0.39～0.84，5号峰1.00，6号峰0.26～0.43，7号峰0.77～1.43，8号峰0.37～0.69，9号峰0.19～0.36，10号峰0.14～0.32。

5.一种用高效液相色谱指纹图谱鉴定生血宁片的方法，其特征在于该方法为：

A、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2％甲酸溶液为流动相A，以体积比为50∶50∶5的乙腈-甲醇-丙酮混合液为流动相B，梯度洗脱；检测波长为392nm；

B、参照物溶液的制备：精密称取对照品二氢卟吩e6适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

C、对照提取物溶液的制备取蚕砂对照提取物50mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

D、待检品溶液的制备：取待检品粉末0.2～0.3g，置于50ml量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声处理10分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

E、测定法：分别精密吸取参照物溶液、对照提取物溶液、待检品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，即得；

F、鉴别法：以对照提取物的色谱图为标准指纹图谱，将待检品色谱图与其进行比对，计算相似度，即得。