[发明专利]一种猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法

权利要求书

1.一种猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)在潮汐式生物反应器中，接种制苗用细胞至生物反应器内的微载体上，进行细胞的吸附培养；

2)在细胞的吸附培养结束后进行细胞的扩增培养；

3)将猪传染性胃肠炎病毒接种到扩增培养的接种制苗用细胞上，进行病毒的吸附培养；

4)在病毒的吸附培养结束后进行病毒的增殖培养；

5)在接种制苗用细胞CPE达到70％以上时，收获病毒液。

2.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，所述微载体由选自聚酯、明胶或多糖的一种或几种制成。

3.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，所述微载体的添加量为5.5～10g/L。

4.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤1)中以2.0×10⁷～3.6×10⁷cells/g载体的细胞密度接种细胞。

5.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤1)中以3.0×10⁷载体的细胞密度接种细胞。

6.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤2)中的细胞扩增培养达到3.0×10⁸～4.5×10⁸cells/g载体的细胞密度时进行步骤3)所述的病毒接种。

7.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤2)中的细胞扩增培养达到3.5×10⁸cells/g载体的细胞密度时进行步骤3)所述的病毒接种。

8.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，步骤3)中所述猪传染性胃肠炎病病毒接种的感染复数为0.01～0.1。

9.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，步骤1)中所述的吸附培养和步骤2)中所述的扩增培养使用DMEM细胞培养液；步骤3)中所述的病毒吸附培养和步骤4)中所述的病毒增殖培养使用1.5％(V/V)牛血清的DMEM细胞培养液，其中所述的牛血清为胎牛血清、新生牛血清或小牛血清。

10.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤1)-步骤4)中载体罐中生长液的液面上下行速度均为0.5～50L/分钟，液面在载体上下端点停滞时间为0～150s，培养程序运行1～24h。

11.根据权利要求10所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤1)-步骤4)中载体罐中生长液的液面上下行速度均为2L/分钟，步骤1)和步骤3)液面在载体上下端点停滞时间为60s，步骤2)和步骤4)液面在载体上下端点停滞时间为30s，其中，步骤1)和步骤2)的细胞吸附和细胞培养程序运行时间为12h；步骤3)和步骤4)中所述的病毒吸附和病毒培养程序的运行时间4h。

12.根据权利要求1中所述的猪传染性胃肠炎病毒的大规模生产方法，其特征在于，在步骤1)至步骤4)的培养过程中控制温度37℃，pH调节7.0～7.5，二氧化碳浓度为3％～5％的条件下进行。

13.根据权利要求1-12任一项的方法获得的猪传染性胃肠炎病毒培养液。