[发明专利]一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定载脂蛋白A2的方法及所述方法使用的试剂盒，具体地本发明涉及一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法及所述方法使用的试剂盒。

背景技术

载脂蛋白A II(ApoA II)是高密度脂蛋白(HDL)中第二种含量多的载脂蛋白。ApoA II由两条多肽链的77个氨基酸残基组成，在不加还原剂的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中测出其分子量是17000D，在人血浆中以二聚体形式存在。ApoA II的单体分子量为8700D。人ApoA II蛋白C端氨基酸残基为谷氨酸，N端为吡咯烷酮酸，缺乏组氨酸，精氨酸及色氨酸。ApoA II有多态性存在，最主要的多态型等电点为4.9，而含量较少的多态型的等电点为5.17、4.68、4.42和4.20。

ApoA II的生理功能之一是维持HDL结构，ApoA II肽段12-31和肽段50-77具有与磷脂的结合能力，经二级结构分析认为，残基17-30和51-62形成的双性螺旋结构是人ApoA II与脂质结合的分子基础，也可能参与HDL受体的识别，在HDL的代谢中具有重要作用；其二是激活肝脂酶，用以水解乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)和磷脂(PL)。体外实验表明，它可能具有抑制卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)和肝磷脂的作用。测定人血浆中ApoA II的含量对研究HDL代谢，探讨动脉粥样硬化、冠心病的发病机理及临床诊断有重要意义。流行病学及临床研究表明，ApoA II含量与冠心病呈负相关，与心肌梗塞呈高度负相关。测定血浆ApoA II、ApoA I及ApoB100含量，可替代血脂的测定作为冠心病诊断的参考指标。

目前一般采用酶联免疫法测定血清脂蛋白Apoa II。酶联免疫法的原理是：将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体；洗涤除去未结合的抗体及杂质。加待测样品，使之与固相抗体接触反应一段时间，让样品中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与样品中待测物质的量正相关。加底物，夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

现有的测定血清脂蛋白Apoa II的方法存在着操作繁琐，设备要求高，样品预处理复杂，不能直接在全自动生化分析仪上进行批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差的缺点。

发明内容

本发明的一个目的是克服现有的测定载脂蛋白A2的方法操作繁琐，设备要求高，样品预处理复杂，不能直接在全自动生化分析仪上进行批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差的缺点，提供一种操作以及预处理过程简单、能直接在全自动生化分析仪上批量检测分析，且对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强的用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法。

现有技术没有使用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的先例，本发明的发明人付出了大量地创造性劳动，大胆地采用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，并且摸索出了该方法实现测量的条件和使用的试剂所组成的试剂盒。

本发明提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，其包括：

向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；

向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物；

测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；

通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量：

式中：ΔAu为以空白管吸光度为对照的待测样品的吸光度值

ΔAs为以空白管吸光度为对照的校准品的吸光度值

Cs为校准品中ApoA II的浓度；

其中，所述反应剂包括：防腐剂0.2-1.5g/L、稳定剂0.5-3g/L、电解质0.1-6g/L、表面活性剂1-10g/L，高分子加速剂2-5g/L和反应促进剂0.1-0.5g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；

所述抗ApoA II抗体溶液包括：抗ApoA II抗体5-60g/L、抗氧化剂0.01-0.8g/L、稳定剂1-30g/L，防腐剂0.01-5g/L、电解质0.1-6g/L、高分子加速剂2-5g/L和表面活性剂0.1-10g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；