[发明专利]一种具有促进间充质干细胞增殖作用的中药组合物及其应用

说明书

技术领域

本发明属细胞生物学领域，涉及一种中药组合物的用途，具体涉及淫羊藿素和红景天苷在促进间充质干细胞增殖方面的用途。本发明还涉及该中药组合物在治疗细胞损伤疾病中的用途。 

背景技术

干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞，在特定条件下，还可以增殖并定向分化成不同的功能细胞。因此干细胞的研究对生命体各个组织器官的更新和损伤修复有重要意义，逐渐成为许多无法治愈的疾病，特别是细胞及组织缺失或损伤性疾病的唯一希望。干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞，胚胎干细胞由于伦理问题，其应用受到极大的限制；而成体干细胞由于可以分化为功能细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础，为研究哺乳动物早期发育提供了很好的体外模型，可为许多疾病的细胞替代疗法提供新的细胞来源，也标志着现代生物学的发展和新药物的研发进入了新时代。 

到目前为止，只有少量的成体组织干细胞，可在体外进行无血清扩增培养，但需要加入不同的生长因子、信号分子等进行遗传调控。显然，体外扩增培养干细胞，需要有更安全、更有效的细胞培养技术。 

淫羊藿(Herba Epimedii)系小檗科淫羊藿属植物，具有补肾壮阳、祛风除湿等功效。现代药理研究证明，淫羊霍含有特殊的化学成分和显著的生物活性，是一种具有广泛药理活性的中药材。淫羊藿中的淫羊藿素等黄酮醇类化合物具有治疗心脑血管疾病，防治骨质疏松等的药理作用。淫羊藿素是淫羊藿中主要有效成分淫羊藿苷的苷元，化学结构式如下： 

红景天系景天(Crassulaceae)科红景天属植物，为多年生草本或亚灌木植物，主要分布在北半球的喜马拉雅山区、亚洲西北部和北美洲海拔在1600-4000米的地区。红景天药用历史悠久，素有“黄金人参”、“神仙草”之称。药典记载红景天为景天科 植物大花红景天的干燥根及根茎，其性甘、苦、平，益气活血、通脉平喘，可用于气虚血瘀、胸痹心痛、中风偏瘫和怠倦气喘。现代药理研究表明，红景天的生物活性与所含的多种化学成分密不可分。 

红景天苷是从红景天中分离提纯的天然产物，为一种单体化合物，是红景天的有效成分之一，部分相关科属中药也含红景天苷，化学结构式如下： 

发明内容

本发明的目的是提供具有干细胞增殖作用的中药组合物。本发明提供的中药组合物可以作为干细胞增殖促进剂以及作为大量制备干细胞的药物，也可以用于科研，为干细胞的基础研究提供大量干细胞。本发明提供的中药组合物能够促进干细胞增殖及功能细胞的修复，也能用于干细胞增殖机理的研究。 

本发明提供的中药组合物通过如下步骤进行制备： 

淫羊藿苷超声溶解在尽可能少的甲醇中，边搅拌边缓慢加入含纤维素酶的缓冲液，37℃反应过夜。使淫羊藿苷结构上的葡萄糖和鼠李糖被充分水解，乙酸乙酯萃取水解产物，旋转蒸发仪挥发干燥即得淫羊藿素。有研究报道，淫羊藿提取物的体内药理实验显示淫羊藿素具有雌激素样药理活性，能使雌性小鼠子宫增重，雌二醇含量升高。这类具有雌激素活性的天然植物化合物，具有抗氧化、抗血管生成、抑制癌细胞分化等作用，对激素依赖性癌症、心血管疾病以及绝经后骨质疏松和更年期不适症、早老年性痴呆有较好的预防和治疗作用。 

红景天苷单体的分离纯化方法：以红景天粉为原料，以水为溶剂用微波法提取红景天苷，最佳工艺参数为：液固比20∶1，浸泡时间1.5h，低功率微波处理60S，磁力搅拌15min，提取2次，提取率可达90％。红景天苷的药理作用包括抗缺氧化、抗疲劳作用及体外清除羟自由基的能力。红景天苷可抑制大鼠缺血再灌注引起的白细胞 介素1β表达的增加，减少脑缺血灌注后脑组织中TNF-α的表达，起到保护脑血管的作用；通过抑制血管ACE的表达，在一定程度上可抗心肌缺血，提高机体免疫能力。 

本发明的发明人在实验中发现，淫羊藿素和红景天苷的组合物在一定浓度和配比下对体外培养的人间充质干细胞具有促增殖作用，使这些细胞在较长时间内维持增殖状态，与传统的培养方法相比较，细胞的生长速度更快，细胞活性更高。 

本发明包括以下内容： 

间充质干细胞增殖试剂是能够增加间充质干细胞数量的物质，例如，可通过刺激增殖、抑制分化和防止间充质干细胞死亡增加间充质干细胞数量。 

本发明所述的中药组合物包括淫羊藿素和红景天苷。按照前述方法提取出淫羊藿素和红景天苷，其优选组合比例为5∶1。 

本发明所述的中药组合物用量：按照1％的比例加入到基础培养基中。基础培养基包括DMEM/F12，1640，αMEM等。