[发明专利]一种单克隆抗体mcf2及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一株单克隆抗体mcf2及其应用，具体涉及心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf2及其应用。 

背景技术

脂肪酸结合蛋白(FABPs)是一组多源性的小分子细胞内蛋白质，分子量为12～16KDa，广泛分布于哺乳动物的小肠、肝、脂肪、心、脑、骨骼肌等多种细胞中。有小肠型(I-FABP)、心肌型(H-FABP)、肝脏型(L-FABP)、肾脏型(K-FABP)等亚型。不同型FABP的序列有较大的同源性。心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)分子量为14～15KDa，等电点(PI)为5.1，可将脂肪酸从细胞质膜向发生酯化和氧化的部位运输，从而进入线粒体的能量代谢体系之中，使脂肪酸在此氧化分解并最终生成三磷酸腺苷(ATP)，为心肌收缩提供能量。人H-FABP由132个氨基酸残基组成，在心肌中含量丰富，约占心脏全部可溶性蛋白的4％～8％，每克湿重心肌中含H-FABP约(0.52±0.06)mg。正常人的血浆和尿中不含有H-FABP或含量甚少。当心肌细胞受损时可快速释放到血和尿中。由于各型FABP具有各自特异的抗原决定簇，可以通过免疫学方法将H-FABP与其他型FABP相区分。随着FABP测定方法的研究和临床的应用，H-FABP已成为早期心肌损伤诊断的标志物(中国实验诊断学，2005年2月第9卷第1期)。 

发明内容

本发明的目的是提供分泌心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 

本发明的另一目的是提供心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体。 

本发明的又一目的是提供心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的应用。 

一株分泌心脏型脂肪酸结合蛋白的杂交瘤细胞株MCF2，与2011年9月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C201181。 

所述的保藏号为CCTCC NO：C201181的杂交瘤细胞株MCF2分泌的抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf2。 

所述的保藏号为CCTCC NO：C201181的杂交瘤细胞株MCF2分泌的抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体mcf2在检测或纯化人心脏型脂肪酸结合蛋白中的应用。 

所述的保藏号为CCTCC NO：C201181的杂交瘤细胞株MCF2分泌的抗人心脏型脂肪酸 结合蛋白单克隆抗体mcf2在制备人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂中的应用。 

所述的人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂优选检测检测人心脏型脂肪酸结合蛋白的Western Blot试剂、ELISA检测试剂、胶体金检测试剂。 

本发明的有益效果： 

本发明利用纯化的人H-FABP(心脏型脂肪酸结合蛋白)作为免疫原，经过皮下免疫、常规细胞融合、筛选及克隆化，获得了一株能够稳定分泌抗H-FABP单克隆抗体的杂交瘤细胞株MCF2(CCTCC NO：C201181)。经ELISA、免疫印迹等方法鉴定，该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能够特异性识别H-FABP(Hytest公司)，效价高、特异性强。 

本发明H-FABP单克隆抗体的应用如下： 

(1)应用该抗体可Western Blot检测心肌组织的H-FABP表达。 

(2)应用该抗体可建立金标试剂盒快速检测各种体液如血液、血浆、血清、尿的H-FABP的水平。 

(3)应用该抗体可建立ELISA检测试剂盒定量检测各种体液如血液、血浆、血清、尿的H-FABP的水平。 

(4)应用该抗体制备免疫亲和层析柱，来分离纯化H-FABP蛋白。 

(5)应用该抗体进行免疫组化检测心肌组织中H-FABP蛋白表达量。 

本发明还进一步确认了所述的单克隆抗体在体外用于检测体液或组织中H-FABP的表达。例如用于检测各种体液如血液、血浆、血清及尿液的H-FABP的水平；还可以测定各种疾病如急性心肌梗死等急性心肌损伤疾病H-FABP的表达水平，作为临床诊断或辅助诊断的一个标志物。本发明制得的人H-FABP单克隆抗体mcf2，为H-FABP的基础研究和临床研究提供了有利的工具。 

附图说明：

图1心肌粗提液Sephadex G75凝胶过滤柱层析洗脱曲线。 

图2心肌粗提液Sephadex G75经凝胶过滤柱层析后各组分(Tricine)-SDS-PAGE电泳。 

A：第36号管开始于M15000附近出现清晰蛋白条带；