[发明专利]固氮斯氏假单胞菌A1501 rpoN基因的表达方法无效
| 申请号： | 201110326704.4 | 申请日： | 2011-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN102417882A | 公开（公告）日： | 2012-04-18 |
| 发明（设计）人： | 刘国宪;李轶女;张志芳;沈桂芳;程奇 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/13 | 分类号： | C12N1/13;C12N15/79;C12R1/38;C12R1/89 |
| 代理公司： | 北京市德权律师事务所 11302 | 代理人： | 余光军 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 固氮 斯氏假单胞菌 a1501 rpon 基因 表达 方法 | ||
1.一种固氮斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri） A1501的rpoN基因的表达方法，其特征在于，包括：构建rpoN基因的表达盒；将所构建的rpoN基因的表达盒插入到衣藻叶绿体表达载体上的衣藻叶绿体基因组的同源片段之间，构建得到重组衣藻叶绿体表达载体；将重组衣藻叶绿体表达载体转化衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）；筛选转基因衣藻，诱导转基因衣藻中的rpoN基因表达，收获并纯化所表达的蛋白。
2. 按照权利要求1所述的表达方法，其特征在于：所述rpoN基因的表达盒由衣藻叶绿体特异启动子、rpoN基因和衣藻叶绿体特异终止子所组成。
3. 按照权利要求2所述的表达方法，其特征在于：所述rpoN基因置于衣藻叶绿体基因特异启动子和终止子的调控之下。
4. 按照权利要求2或3所述的表达方法，其特征在于：所述的衣藻叶绿体特异启动子包括atpA、atpB、psbA、psbD或rbcL；所述的衣藻叶绿体特异终止子为rbcL终止子。
5. 按照权利要求1-3任何一项所述的表达方法，其特征在于：所述rpoN基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示。
6. 按照权利要求1所述的表达方法，其特征在于：所述的衣藻叶绿体基因组的同源片段为trnE2-psbH基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示。
7. 按照权利要求1所述的表达方法，其特征在于：所述的衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）的品系为cw15。
8.按照权利要求1所述的表达方法，其特征在于：所述的重组衣藻叶绿体表达载体转化衣藻的方式为采用包裹有重组衣藻叶绿体表达载体的基因枪轰击处于生长对数期后期的衣藻。
9.按照权利要求1所述的表达方法，其特征在于：所述的筛选转基因衣藻是通过无醋酸盐的培养基筛选得到转基因衣藻。
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