[发明专利]胚胎干细胞体外分化中药活性物质药效筛选模型的建立及应用

权利要求书

1.一种胚胎干细胞体外定向分化药物筛选模型的构建及应用，其特征是：在药物诱导下，使胚胎干细胞(ES)定向分化成单一类型细胞，构建高效率药效筛选模型，并利用该模型进行中药活性成分药效筛选和评估，本发明主要分以下几个步骤：

(1)利用已有的ES细胞的支持培养；

(2)药物诱导ES细胞定向分化为单一类型细胞的培养；

(3)利用该模型进行药效筛选与评估。

2.如权利要求1所述的利用已有的ES细胞的支持培养，其特征是：选用小鼠胚胎干细胞D3细胞株(ES-D3细胞株)，接种于滋养层细胞上，按常规方法进行传代培养。

3.如权利要求1所述的药物诱导ES细胞定向分化为单一类型细胞的培养，其特征是：当诱导定向分化为单一类型细胞时，这类细胞包含心肌细胞，用培养基将ES-D3细胞制成单细胞悬液，再悬滴培养成拟胚体，拟胚体进行贴壁培养，加入供试药物共同培养，以拟胚体细胞团出现特定标志，作为定向分化成功的指标。

4.如权利要求3所述的药物诱导ES细胞定向分化为单一类型细胞的培养，其特征是：当诱导定向分化为心肌细胞时，拟胚体细胞团出现的特定标志是有节律地搏动。

5.如权利要求3所述的药物诱导ES细胞定向分化为单一类型细胞的培养，其特征是：测试药物可以是银杏黄酮、黄芪、淫羊藿苷、葛根素、丹参等中药活性物质。

6.如权利要求1所述的胚胎干细胞体外定向分化药物筛选模型的构建及应用，其特征是：利用该方法，可构建心肌细胞定向分化模型、神经元定向分化模型、血管发生定向分化模型及其他多种单一类型细胞模型，用于药效初步筛选与评估。