[发明专利]一种高纯度白鹤灵芝素C的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高纯度白鹤灵芝素C的制备方法，尤其是涉及一种采用高速逆流色谱法制备高纯度白鹤灵芝素C的方法。

背景技术

白鹤灵芝素C（Rhinacanthin C）为萘醌类物质，黄色油状物，无明显熔点，分子式C₂₅H₃₀O₅，分子量410.51。现代药理研究表明其具有以下药理作用：（1）细胞毒活性，对下述细胞株的ED50（微克/毫升）分别为KB（6.26）、P388（0.26）、A-549（0.35）、HT-29（0.68）、HL-60（0.68）；（2）抗血小板聚集作用，本品100微克/毫升时100%抑制花生四烯酸（100μM）诱导的兔血小板聚集；75.2%抑制胶原（10微克/毫升）诱导的兔血小板聚集；（3）显著抑制人型和鼠型巨细胞病毒（CMV），EC₅₀（微克/毫升）为0.02（人型）和0.57（鼠型），选择指数为28和4.6。

白鹤灵芝Rhinacanthus nasutus（L.）Lindau，为爵床科白鹤灵芝属植物白鹤灵芝，多以干燥地上部分、枝叶入药。主产于广西、广东、云南等地深山，是苗疆秘传的珍贵药材，因其功效有如灵芝，又花白色，唇型，生在叶腋或枝顶，形成群展飞翔的白鹤，故名“白鹤灵芝”。其味甘，性温，具有润肺止咳、平喘祛痰、清热疏肝、利湿止痒、收敛止血等功效，用于治疗肺热燥咳、肺结核及受到风寒时所产生的咳嗽等症。现代临床研究显示，白鹤灵芝可治疗冠心病、高血压、糖尿病，还可对抗心绞痛，在改善心电图、血脂、改善甲皱微循环和眼底动脉硬化性改变等方面均有一定的疗效，且无明显副作用。

目前对白鹤灵芝的研究主要集中在规范化种植(GAP)与质量控制技术方面，但对白鹤灵芝的有效成分和指标性成分方面的研究比较欠缺。经检索尚未见采用高速逆流色谱法纯化白鹤灵芝素C的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种高纯度白鹤灵芝素C的高效、快速制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

取白鹤灵芝药材粉碎，加6-10倍80-90%甲醇超声提取2-3次，提取液回收试剂加硅藻土干燥，装柱，先用乙醇冲洗杂质，再加入至乙酸乙酯中回流提取，提取液浓缩后再用高速逆流色谱分离，根据图谱收集成分，浓缩干燥即得高纯度白鹤灵芝素C。

所述高纯度白鹤灵芝素C的制备方法，其特征在于所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统为石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，混合比例为2-5:3-7:4-6:3，取上相上相做流动相，下相做固定相。

本发明的积极效果在于：采用高速逆流色谱法分离，是一种液液分配色谱，对分离的样品不产生死吸附，试剂用量少，而且可以回收再使用，单次制备量大，周期短，可连续制备。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

具体实施方式

实施例1：

将白鹤灵芝药材粉碎，取2kg，加10倍90%甲醇超声提取2次，每次1小时，提取液回收试剂加200g硅藻土拌匀，烘干，装柱，先用乙醇冲洗杂质至无黄酮成分，再将硅藻土倒入500ml乙酸乙酯中回流提取2次，收集提取液减压浓缩，得浸膏。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按2:3:4:3在分液漏斗中混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱螺旋管，转动主机，转速调节为700rpm，泵入上相做流动相，待动态平衡后，流速调节为2ml/min，用流动相溶解浸膏，由进样阀进样，根据图谱收集成分，回收试剂，浓缩干燥，得1.4g白鹤灵芝素C，经HPLC检测，含量95.4%。

实施例2：

将白鹤灵芝药材粉碎，取2kg，加6倍80%甲醇超声提取3次，每次1小时，提取液回收试剂加250g硅藻土拌匀，烘干，装柱，先用乙醇冲洗杂质至无黄酮成分，再将硅藻土倒入500ml乙酸乙酯中回流提取2次，收集提取液减压浓缩，得浸膏。取乙酸乙酯、正丁醇、水，按5:7:6:3在分液漏斗中混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱螺旋管，转动主机，转速调节为900rpm，泵入上相做流动相，待动态平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解浸膏，由进样阀进样，根据图谱收集成分，回收试剂，浓缩干燥，得1.6g白鹤灵芝素C，经HPLC检测，含量98.1%。