[发明专利]一种制备洋艾素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备洋艾素的方法，特别是涉及一种采用高速逆流色谱制备洋艾素的方法。

背景技术

洋艾素为黄酮类物质，分子式：C20H20O8，分子量：384，结构式：

臭灵丹草为菊科植物翼齿六凌菊全草，又叫鹿耳林、大黑药，传统医学认为其具有清热解毒、止咳祛痰作用。现有成药灵丹草颗粒、片剂和合剂，用于风热邪毒，咽喉肿痛，肺热咳嗽；急性咽炎、扁桃体炎、上呼吸道感染等症。现代研究发现，臭灵丹草中不仅含有萜类功能性成分，含有黄酮类功能性成分，其中洋艾素就是臭灵丹草中的功能性指标性成分，《药典》2010版规定臭灵丹草中洋艾素含量不得低于0.1%。

通过文献检索，从臭灵丹草中提取洋艾素的方法公开甚少，尤其高纯度的洋艾素制备方法。如文献“臭灵丹菇类和黄酮化合物”采用的方法是水煎煮提取，硅胶柱色谱和重结晶等方法进行分离纯化得到包括洋艾素在内的多种化合物。由于采用传统的硅胶柱分离，分离过程溶剂体系选在复杂，梯度洗脱用量大，周期长，而且会分离过程中会产生死吸附现象，造成产品收率低，不适合洋艾素的制备。

　高速逆流色谱(high speed countercurrentchromatography，简称HSCCC)是一种液-液色谱分离技术，它的固定相和流动相都是液体，没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离等优点。由于HSCCC与传统的柱层析分离纯化方法相比具有明显的优点，因此此项技术己被广泛应用于中药成分分离、保健食品、生物化学、生物工程、天然产物化学、有机合成、环境分析等领域。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种制备洋艾素的快速、高效方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种制备洋艾素的方法，其特征在于：取臭灵丹草粉碎，加入5-15倍量40-90%甲醇溶液超声提取2-3次，提取液减压浓缩至无醇放置沉淀，沉淀物滤出用饱和石灰石水溶解，除去不溶物，再调节中性，过滤，滤出物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器检测，收集目标成分，浓缩结晶，干燥得洋艾素。

所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选三元溶剂体系，优选氯仿、甲醇、水，比例为4-10:3-7:2-5，上相为流动相，下相为固定相。

所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选四元溶剂体系，优选石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，比例为1-10:2-10:2-9:1-9，下相为流动相，上相为固定相。

所述的高速逆流色谱分离时主机转速可为700-1000rpm，流动相流速为1-4ml/min。

本发明的优势是：采用了超临界CO2梯度萃取，先萃取小分子非极性物质，再通入加夹带剂萃取有效成分，所得粗提物含量高，萃取过程中能耗低、无污染、效率高，而且整个工艺操作简单，易于实现工业化生产。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

臭灵丹草粉碎，取2kg，加入10倍量90%甲醇溶液超声提取2次，每次超声30分钟，提取液减压浓缩至无醇放置沉淀，沉淀物滤出，加入200ml饱和石灰石水充分搅拌溶解，除去不溶物，再用稀盐酸调节中性，过滤，得8g粗提物。取氯仿、甲醇、水按3:2:1比例混合，充分分层，取下相注满高速逆流色谱柱，开转主机800rpm，同时泵入上相做流动相，动态平衡后，流速调整3ml/min，流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备，合并流分浓缩结晶，真空干燥得洋艾素1.3g，经HPLC检测，含量98.4%。

实施例2：

臭灵丹草粉碎，取2kg，加入5倍量80%甲醇溶液超声提取3次，每次超声50分钟，提取液减压浓缩至无醇放置沉淀，沉淀物滤出，加入300ml饱和石灰石水充分搅拌溶解，除去不溶物，再用稀硫酸调节中性，过滤，得10g粗提物。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水按2:2:1:1比例混合，充分分层，取上相注满高速逆流色谱柱，开转主机900rpm，同时泵入下相做流动相，动态平衡后，流速调整2ml/min，流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备，合并流分浓缩结晶，真空干燥得洋艾素1.1g，经HPLC检测，含量98.8%。

实施例3：

臭灵丹草粉碎，取2kg，加入8倍量40%甲醇溶液超声提取2次，每次超声60分钟，提取液减压浓缩至无醇放置沉淀，沉淀物滤出，加入200ml饱和石灰石水充分搅拌溶解，除去不溶物，再用稀盐酸调节中性，过滤，得14g粗提物。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水按3:4:2:1比例混合，充分分层，取上相注满高速逆流色谱柱，开转主机700rpm，同时泵入下相做流动相，动态平衡后，流速调整4ml/min，流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备，合并流分浓缩结晶，真空干燥得洋艾素1.4g，经HPLC检测，含量97.5%。