[发明专利]一种促进樟芝活性产物Antrodin C生物合成的发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种促进樟芝活性产物Antrodin C生物合成的发酵方法，尤其是一种通过两阶段溶氧或溶氧与pH相结合的策略提高活性产物Antrodin C生物合成的方法。 

技术背景

樟芝(Antrodia camphorata)属于多孔菌科、薄孔菌属，是我国台湾特有的珍稀药用真菌。长期以来，樟芝被用作解酒保肝的传统药，用于治疗肝脏疾病，食物和药物所引起的中毒症状以及腹泻，腹痛，高血压，皮肤发庠和肿瘤疾病等。大量文献研究表明，樟芝具有保肝、保护神经系统、抗高血压高血脂、抗病毒、抗炎症、抗肿瘤、调节免疫等生物活性。 

由于樟芝的寄主专一性特别强，而其唯一寄主牛樟树非常稀少且生长缓慢，樟芝野生子实体非常难得，而椴木栽培法生长周期长，产量低，难以弥补市场的巨大需求。因此，发酵法生产樟芝活性产物将是一种有效地方法。目前通过樟芝细胞深层液态发酵已较成功的实现了樟芝菌体快速人工培养。现代研究表明，樟芝液态发酵产物在治疗各种肝病方面具有较好的功效。Nakamura(NAKAMURA N，HIRAKAWA A，SHEU C C，et al.Five New Maleic and Succinic Acid Derivatives from the Mycelium of Antrodia camphorata and Their Cytotoxic Effects on LLC Tumor Cell Line[J].Journal of Nature product，67：46-48.)等人从樟芝液态发酵菌体中分离得到五种新的马来酸和琥珀酸衍生物(Antrodin A-E)，是液态发酵樟芝菌体中的主要活性成分，具有显著的抗肝炎活性，其中Antrodin B和Antrodin C对LLC癌症细胞具有良好的抑制效果。Phuong(PHUONG T，MA C M，HATTORI M，et al.Inhibitory effects of antrodins A-E from Antrodia camphorata and their metabolites on hepatitis C virus protease[J].Phytother Res，2009，23(4)：582-584.)研究结果显示樟芝菌丝体中含有的Antrodin A-E对HCV病毒都具有很好的抑制活性，其中Antrodin A抑制能力最高；研究同时发现在体内Antrodin C可以转化为Antrodin A，从而展现良好的保肝活性。Lee(Lee TH，Lee CK，Tsou WL，et al.A New Cytotoxic Agent from Solid-state Fermented Mycelium of Antrodia  camphorata[J].Planta Letter，2007.)等人用正己烷萃取樟芝固态发酵粉末，得到一个新化合物(Antroquinonol)，属于泛醌类化合物，实验表明对乳腺癌、肝癌和前列腺癌等多种癌细胞具有良好的抗癌效果，同时具有抑制HBsAg和HBeAg合成的潜力，从而抑制HBV的复制。 

Shu(SHU C H，LUNG M Y.Effect of pH on the production and molecular weight distribution of exopolysaccharide by Antrodia camphorata in batch cultures[J].Process Biochemistry，2004，39： 

931-937.)等人报道了两阶段pH控制对樟芝液态发酵的影响，但该方法只报道了胞外多糖的生产情况，所公开的最大胞外多糖产量为148mg/L。Shih(SHIH I L，PAN K，HSIEH C.Influence of nutritional components and oxygen supply on the mycelial growth and bioactive metabolites production in submerged culture of Antrodia cinnamomea[J].Process Biochemistry，2006，41：1129-1135.)等报道了培养基组成和溶氧对樟芝液态发酵的影响，但是该方法主要研究了对樟芝胞内多糖和胞外多糖合成的影响。同时，上述方法并没有根据樟芝细胞生长和产外核层所需要的环境条件(如pH和溶氧)的差异性，采用相应的组合控制策略分别促进樟芝细胞生长和产物合成。