[发明专利]一种华贵栉孔扇贝自交系的建立方法

权利要求书

1.一种华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：从华贵栉孔扇贝中选择出雌雄同体的个体，采用自交的方法建立和培育自交系；通过解剖法获取配子，并通过氨海水刺激法促进精、卵成熟，完成受精和胚胎发育。

2.根据权利要求 1 所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：所述的自交的方法为：挑选性腺成熟的、外观上为雌性的华贵栉孔扇贝，对其进行诱导催产，每个个体在相互隔离的条件下独立排放精、卵，并使同一个个体所产的精、卵进行自体受精，然后进行胚胎孵化、幼虫培育及养成；在操作过程中采取隔离措施，避免自交系以外的个体混入其中。

3.根据权利要求 1或2 所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：雌雄同体个体的鉴别方法为：用注射器针穿刺性腺组织，涂抹在载玻片上并滴一滴海水，将载玻片上置于显微镜下观察，如样品中含有卵和精子，则该个体为雌雄同体个体。

4.根据权利要求1或2所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：催产和授精的方法为：将挑选出的雌雄同体个体阴干 30-60 分钟后，流水冲20-30分钟，将每个贝单独放入一个容器中，每个容器中事先加入比原培育水温高 3- 5 ℃的海水；观察贝的精卵排放情况；将同一个个体所产的卵与精子进行受精，避免其他个体的配子混入。

5.根据权利要求1或2所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：对于先产精后产卵的情况，采取以下措施：当含有精子的水体呈现乳白色时，将贝取出置于另一容器中继续排放，并保留精液；当该贝开始排卵时，即刻将该贝取出并冲洗，然后置于新鲜的过滤海水中让其产卵，当产卵水体中卵的数量达到10个/mL以上或不再排放时，取样于显微镜下观察，当 50 ％以下的卵子外周可观察的精子数量少于一个时，按体积比1：100加入该贝的精液，并搅动水体，3- 5 分钟后取样于显微镜下观察， 到90%以上的卵子外周可观察到1-2个精子时停止加入精液。

6.根据权利要求1或2所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：对于先产卵后产精的情况，采取以下措施：当产卵量达到10个/mL以上时，将贝取出置于另一容器中让其排精，然后按体积比1：100加入精液到该贝所产卵中。

7.根据权利要求1或2所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：针对产精不产卵或产卵不产精的情况，采取以下措施：对于产精不产卵，产卵不产精的个体，在常规催产结束后对亲本生殖腺进行解剖，然后将获得的配子在氨海水中进行人工授精。

8.根据权利要求7 所述华贵栉孔扇贝自交系的建立方法，其特征在于：用解剖刀剖开贝体，剪取性腺并剪碎，用200-300目筛绢袋挤压性腺组织，获得挤压物；对产精不产卵的情况，将性腺组织挤压物放入较大容器中，事先盛有 50 - 200 升的0.002-0.005%的氨海水，30分钟后吸出容器上层2/3的水体，并加入过滤海水，重复3次；对产卵不产精的情况，则将挤压物置于1L 的0.002-0.005%的氨海水中，按1：100的体积比加入已收集的卵中，显微镜检查卵周围精子的数量，当50%卵周围的精子少于1个时，添加精液直至90%以上的卵周围有1-2个精子时停止。