[发明专利]一种桑白皮总黄酮的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取物技术领域，特别是涉及一种桑白皮总黄酮的纯化方法。

背景技术

桑白皮(Cortex Mori)为桑科植物桑属植物( Morus alba L1) 的干燥根皮，性甘、寒，归肺经，有泻肺平喘、利水消肿之功效。桑白皮主要含多种黄酮类成分，包括摩鲁新L.、桑根白皮素(Morusin)、环桑素、桑酮。环桑烯等。文献报道其总黄酮具有利尿、降压、降糖、镇痛、镇静、抗癌及抗HIV等作用。桑白皮通常采用乙醇溶液提取获得总黄酮粗提物，该粗提物中总黄酮的含量较低，还不能达到使用要求。目前，有用聚酰胺来纯化桑白皮总黄酮的报道，但聚酰胺的死吸附严重、不易洗脱，总黄酮的损失很大，并且用聚酰胺纯化后的总黄酮含量为33.5%，也是远远达不到药品注册管理办法规定的有效部位含量占提取物的50%以上的规定。

大孔吸附树脂是一种具有多孔性的高分子分离材料，具有稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、操作简便、成本较低、可反复使用等特点。大孔吸附树脂主要是通过物理作用从溶液中有选择性地吸附有机物质，从而达到分离纯化的目的。大孔树脂纯化技术是中药制药工业中颇具发展前景的实用新技术之一，已被成功地应用于黄酮类、皂苷类、生物碱类等药物的提取分离，在葛根、银杏黄酮纯化中运用比较广泛。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有桑白皮总黄酮提取物中总黄酮含量低的缺陷，提供一种桑白皮总黄酮的纯化方法，纯化后，总黄酮的含量可达53.6%。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

    本发明桑白皮总黄酮的纯化方法：取桑白皮总黄酮粗提物，用乙醇溶液溶解为相当于原生药0.5～1g/l的粗提物溶液，调整pH为5～6，以1.5～2.5BV/h的上样流速上大孔树脂层析柱层析，上样体积≤2BV，吸附完成后先用8～12BV蒸馏水洗脱，再用50～95%的乙醇溶液以1～1.5BV/h的流速洗脱至无黄酮为止，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得高纯度桑白皮总黄酮提取物。

优选的，上述桑白皮总黄酮的纯化方法为：取桑白皮总黄酮粗提物，用70%乙醇溶液溶解为相当于原生药0.7g/l的粗提物溶液，调整pH为5～6，以2BV/h的上样流速上大孔树脂层析柱层析，上样体积≤2BV，吸附完成后先用10BV蒸馏水洗脱，然后用70%的乙醇溶液以1BV/h的流速洗脱至无黄酮为止，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得高纯度桑白皮总黄酮提取物。

优选的，前述纯化方法中所用的大孔树脂为弱极性大孔树脂，优选AB-8型大孔树脂。

上述技术方案是通过如下的实验筛选出来的：

1、材料与仪器

1.1材料

药材：桑白皮(Cortex Mori)，购于贵州圣济堂公司，经贵州大学廖海民教授鉴定为桑科植物桑属植物( Morus alba L1) 的干燥根皮。标准品：摩鲁新L（自制），经HPLC的C谱、H谱、红外、紫外鉴定为单一化合物，纯度为98%以上。 大孔树脂：AB-8、D101、S-8。

1.2 主要仪器与设备

旋转蒸发器RE-52A：上海亚荣生化仪器厂；SHB-95型循环水式多用真空泵：巩义市英峪予华仪器厂；DJ-200A电子天枰： 莆田市秀屿区亚太电子天平厂；SP--2100型可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司．

2、方法

2.1 摩鲁新L标准工作曲线及回归方程

准确称取经105℃干燥至恒量的摩鲁新L.28.7mg，无水乙醇60℃水浴加热溶解, 室温冷却后转入50ml容量瓶中,无水乙醇定容, 摇匀，得0.574mg/ml的对照品溶液，备用。

精密吸取上述的摩鲁新L对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置于10.0 ml容量瓶中，再分别向其中加入3%（重量）AlCl₃水溶液0.5ml进行显色，无水乙醇定容，同时设空白对照组（不加显色剂），溶液摇匀放置30min，在波长为401nm处空白对照组校零后测定A值。数据处理得回归方程: A = 10.727C-0.0307（R²=0.9996）。表明其浓度在0.0116 mg/ml～0.0696mg/ml范围有良好的线性线性关系。

2.2 树脂预处理