[发明专利]叶酸介导的肿瘤靶向阿霉素前体药物的制备及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及两种阿霉素前体药物的制备方法以及应用。 

背景技术

恶性肿瘤严重危害人类健康和生存，是引起死亡的主要原因之一，其发病率一直高居不下，目前已呈现明显的年轻化趋势。2000年，世界卫生组织报告，全球癌症死亡例数已超过700万，其中发达国家占21％，发展中国家占9％，肿瘤引起的死亡人数占全球死亡人数的12％。恶性肿瘤在我国已成为城乡居民的首要死亡原因，每年新增病例约200万，死亡170万。 

蒽环类抗生素是临床最常用且有效的抗肿瘤药物之一，阿霉素是这类抗肿瘤药物的代表药物，最早于上世纪60年代从链球菌的色素代谢产物中获得。阿霉素是一种广谱的化疗药物，在临床上常用于治疗乳腺癌，儿童实体瘤，软组织瘤，恶心淋巴癌等恶性肿瘤。近年来的临床研究发现，阿霉素的临床应用中，已出现针对肿瘤细胞的耐药性，同时对于正常组织的细胞毒性限制了其进一步的应用。长期使用这类药物最常见的毒性为损伤心肌，可以诱发充血性心力衰竭。鉴于以上原因，人们针对阿霉素的改造和修饰一直在继续，通过将具有肿瘤靶向性的特殊转运载体或可以被肿瘤组织特异性识别的分子与阿霉素结合，制成具有肿瘤靶向性的阿霉素前体药物，是目前人们一直致力于寻找增加其药效和安全性的策略之一。 

目前，依据前体药物的设计理念，针对阿霉素结构改造的部位主要集中在13位的羰基和3’位的氨基。其中，可以将13位的羰基与不同分子的酰肼基团(修饰基团)连接，缩水反应形成腙键连接物，腙键在中性环境下较稳定，在偏酸的环境下可裂解释放出阿霉素原药。研究表明，肿瘤细胞生长代谢活跃，周围pH值明显低于正常组织，因此腙键的形成可发挥酸敏作用，具有肿瘤靶向的作用。 

不同的载体分子具有不同的特点，其与原药结合的方式或者作用于肿瘤组织的特点有所差别。聚乙二醇(PEG)可以延缓药物清除的速率，延长药物的半衰期，增加抗肿瘤药物在肿瘤部位的蓄积，局部浓度可达5-10倍，进而发挥肿瘤组织被动靶向 的作用。PEG可与多种药物通过共价键连接，从而合成不同的大分子前体药物，目前已广泛用于药物制剂及药物传递系统中。 

目前，肿瘤细胞叶酸受体受到广泛关注。叶酸受体是一种糖基化磷脂肌醇连接的膜糖蛋白，在许多肿瘤细胞中高表达，而在大多数正常组织中几乎不表达。因此将叶酸与抗肿瘤药物连接，可使药物靶向至肿瘤细胞，选择性的杀伤肿瘤细胞，并减轻对正常组织的损害。 

发明内容

本发明的目的是提供两种阿霉素前体药物的制备方法以及应用，将阿霉素分别与修饰的聚乙二醇、叶酸相结合得到两种具有酸敏活性的阿霉素靶向前体药，可能会增强阿霉素的抗肿瘤作用，降低药物毒副作用，提高靶向性，为抗肿瘤药物的开发提供新的思路。 

本发明的前体药有两种：1.阿霉素与聚乙二醇、叶酸结合得到的阿霉素前体药。 

2.阿霉素与叶酸通过氨基己酸连接得到的阿霉素前药。 

阿霉素的结构式如下： 

叶酸-氨基己酸-阿霉素的合成路线： 

具体合成方法如下： 

1氨基己酸乙酯的合成 

三口瓶中加入无水乙醇，冰盐水浴冷却至-10℃以下，滴加重蒸的二氯亚砜，保持温度在0℃以下。滴毕，常温下搅拌10h，加入氨基己酸升温回流反应7h，减压蒸出过量的二氯亚砜和乙醇，残余物固化，用甲醇∶石油醚(v∶v＝5∶1)重结晶， 得白色固体。 

2叶酸氨基己酸乙酯的合成 

精密称取叶酸加入无水二甲基亚砜(DMSO)，搅拌混匀，再依次加入NHS，DCC，三乙胺，室温氮气避光活化6h；然后加入氨基己酸乙酯，反应12h。过滤反应副产物DCU，最后用丙酮-乙醚沉淀，乙醚反复冲洗，得粗品。过柱分离得纯品。 

3叶酸氨基己酸酰肼的合成 

精密称取叶酸氨基己酸乙酯，溶于无水DMSO中，然后加入4mL的水合肼，50℃避光反应6h，最后用乙醇沉淀，乙醚反复冲洗，得粗品。过柱分离得纯品。4叶酸-氨基己酸-阿霉素的合成 

精密称取叶酸氨基己酸酰肼，溶于无水DMSO中。充分溶解后加入75mg阿霉素，缓慢滴加60μL的三氟乙酸，室温避光反应12h；最后用丙酮-乙醚沉淀，乙醚反复冲洗，得粗品。过柱分离得纯品。 

阿霉素-PEG-叶酸腙键连接物的合成方法如下： 

1、HOOC-PEG-叶酸的合成