[发明专利]一种定量检测硫代氧化型辅酶（Thio-NAD）的循环酶检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种定量检测硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)的循环酶检测方法，其特征在于：配制pH8.5-10.50Tris-HCl缓冲液，其中含有一定量的辅酶I(NADH)、脱氧胆酸钠、3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)、海藻糖，加入含Thio-NAD的待测样品，反应中生成的Thio-NADH在405nm处有最大吸收，通过测定37℃反应一段时间后特定波长下溶液的吸光度值，计算出待测样品中Thio-NAD的含量。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)的循环酶检测方法，其特征在于：pH8.5-10.50Tris-HCl缓冲液浓度为20-2500mmol/L、NADH的浓度为2-6g/L、脱氧胆酸钠浓度为25-100μmol/L、海藻糖为2-10％、3α-HSD的浓度为0.5-5KU/L、待测样品的浓度为5.0-1400mg/L。

3.据权利要求1或2所述的一种定量检测硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)的循环酶检测方法，其特征在于：样品中Thio-NAD的计算公式为：待测样品中Thio-NAD含量(μmol/L)＝(A-A₀)×V₁×10⁶/(ε×V₂)，其中A为样品管反应吸光度值，A₀为同体积的去离子水代替样品所测得的吸光度值，为V₁总反应体积，V₂为样品体积，ε为特定波长下Thio-NAD摩尔吸光值。

4.一种用于权利要求1-3所述的循环酶检测方法的检测试剂盒，其为含有一定量的辅酶I(NADH)、脱氧胆酸钠、3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)和海藻糖的pH8.5-10.50Tris-HCl缓冲液。

5.权利要求4所述的检测试剂盒，其中pH8.5-10.50Tris-HCl缓冲液浓度为20-2500mmol/L、NADH的浓度为2-6g/L、脱氧胆酸钠浓度为25-100μmol/L、海藻糖为2-10％、3α-HSD的浓度为0.5-5KU/L、待测样品的浓度为5.0-1400mg/L。