[发明专利]一种软紫草和硬紫草的液相-圆二色谱（LC-CD）鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及软紫草和硬紫草的鉴定技术，特别的涉及液相-圆二色谱(LC-CD)准确地鉴定软紫草和硬紫草药材和提取物(包括含有紫草的复方中药、萘醌类成分单体)的方法。 

背景技术

紫草在我国有悠久的药用历史，其味甘咸，性寒，归心包络肝经，有凉血、活血、清热、解毒等功效，中医临床主要用于湿性斑疹、紫癜、血尿、淋浊和血痢、热结便秘、烧伤、湿疹、丹毒、痈疡等病。 

紫草(Radix Arnrbiae，Radix Lithospermi)为紫草科(Boraginaceae)植物新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst.、紫草Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.或内蒙紫草Arnebiaguttata Bunge的干燥根^[1]。其中新疆紫草又名软紫草，紫草或内蒙紫草又称硬紫草，软紫草和硬紫草是药用紫草的主要来源。 

文献报道表明^[2，3]，紫草中含有多种化学成分，包括紫草萘醌类、酚酸类、生物碱类、苯酚及苯醌类、三萜酸及甾醇类、黄酮类以及多糖类等物质。其中研究最多的是紫草萘醌类化合物，国内外学者从不同种属紫草植物的根中分离得到多种萘醌化合物，如：β-羟基异戊酰紫草素、紫草素、2，3-二甲基戊烯酰紫草素、乙酰紫草素、β，β-二甲基丙烯酰紫草素、异丁酰紫草素、α-甲基-正丁酰紫草素、异戊酰紫草素、去氢阿卡宁(去氢异紫草素)、去氧紫草素、β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、β-羟基异戊酰阿卡宁等。天然存在的紫草萘醌有两种光学异构体，一种为R型(命名为紫草素类)，一种为S型(命名为阿卡宁类)，它们互为对映体^[4，5]。 

紫草素类         阿卡宁类 

软紫草和硬紫草从外观形态和所含有的萘醌类成分的比例等方面均很难鉴别，一般很难准确地区分软紫草和硬紫草。软紫草和硬紫草功效和作用不同，如果不加以准确区分，市场流通和临床应用过程中将产生混乱，可严重影响药物的疗效和安全性，因此，找到一种准确区分和鉴定软紫草和硬紫草药材，尤其是软紫草和硬紫草提取物(包括含有紫草的复方中药、 萘醌类成分单体)，将具有重要的理论意义和实际应用价值。 

发明内容

本发明分别从软紫草和硬紫草中分离纯化了7对萘醌对映异构体：阿卡宁(1)、乙酰阿卡宁(2)、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(3)、去氧阿卡宁(4)、异丁酰阿卡宁(5)、β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁(6)、异戊酰阿卡宁(7)、α-甲基-正丁酰阿卡宁(8)、紫草素(10)、β-羟基异戊酰紫草素(11)、乙酰紫草素(12)、去氧紫草素(4)、异丁酰紫草素(14)、β，β-二甲基丙烯酰紫草素(15)、异戊酰紫草素(16)、α-甲基-正丁酰紫草素(17)。分别测定了它们的圆二色谱(CD)，发现它们均具有如下的特征：软紫草中的阿卡宁类萘醌类似物的CD图谱(部分光谱见图1-7)在210-240nm，250-300nm，325-400nm和450-600nm分别给出负的Cotton效应，在200-210nm，240-250nm，300-325nm，400-450nm分别给出正的Cotton效应；硬紫草中的紫草素类萘醌类似物的CD图谱在210-240nm，250-300nm，325-400nm和450-600nm分别给出正的Cotton效应，在200-210nm，240-250nm，300-325nm，400-450nm分别给出负的Cotton效应，两者成分的CD吸收曲线恰好相反。 

我们发现，如果利用HPLC等液相色谱技术，分离分析出紫草中的萘醌类衍生物，再利用圆二色谱(CD)检测它们的圆二色性，就可以很好地区分和鉴定软紫草和硬紫草药材，尤其是软紫草和硬紫草提取物(包括含有紫草的复方中药、萘醌类成分单体)。 

为此，我们研究发现了良好分离分析紫草中的萘醌类衍生物的液相-圆二色谱(LC-CD)条件，发现了检测软紫草和硬紫草的圆二色谱(CD)几个最佳的波长范围(210-240nm，250-300nm，325-400nm和450-600nm，200-210nm，240-250nm，300-325nm，400-450nm)和最佳波长(220nm，245nm，260nm，310nm，360nm，430nm和550nm)。从而，提供了一种准确地鉴定和区分软紫草和硬紫草药材和提取物(包括含有紫草的复方中药、萘醌类成分单体)的方法。