[发明专利]一种软紫草和硬紫草的液相-圆二色谱（LC-CD）鉴定方法

权利要求书

1.一种软紫草和硬紫草的液相-圆二色谱(LC-CD)鉴定方法，其特征是利用高效液相色谱(HPLC)技术，分离出紫草中的萘醌类衍生物，再利用圆二色谱(CD)检测它们的圆二色性，利用圆二色色谱图中的峰的正负特性鉴定软紫草和硬紫草。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征为圆二色谱(CD)检测波长范围为：210-240nm，250-300nm，325-400nm和450-600nm，200-210nm，240-240nm，300-325nm，400-450nm。

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征是圆二色谱(CD)检测波长为：220nm，245nm，260nm，310nm，360nm，430nm和550nm。

4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征是圆二色谱(CD)检测波长为：220nm，245nm，260nm和550nm。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征是

i.色谱条件：色谱柱为Scienhome Kromasil C18(4.6mm×200mm，5μm)及预柱，流动相为乙腈(A)-0.3％磷酸水(B)，梯度洗脱过程(A梯度)0-10分钟70％，10-30分钟70％-75％，30-31分钟75％-95％，31-36分钟95％，36-37分钟95％-70％，37-50分钟70％；检测波长274nm(或者220nm，245nm，260nm，310nm，360nm，430nm和550nm)，柱温30℃，流速1.0mL/min，理论板数以萘醌计不低于3000；其紫外光谱的回归方程、线性范围、最低检测限和定量限符合检测误差要求；

ii.样品溶液的配置方法1：精密称取软紫草或硬紫草样品(药材、提取物、化学成分单体、含有紫草的复方中药等)各适量，用甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)提取，回收提取液，甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)溶解，经装填ODS(十二烷基键合硅胶)的SPE小色谱柱预处理，水(或者低浓度有机溶剂)洗脱除杂，继用乙腈(或甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)洗涤，合并洗脱液，甲醇溶解，定容，过滤，即得；

iii.样品溶液的配置方法2：精密称取软紫草或硬紫草样品(药材、提取物、化学成分单体、含有紫草的复方中药等)各适量，用甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)提取，回收提取液，甲醇溶解，定容，过滤，即得；

iv.样品溶液的配置方法3：精密称取软紫草或硬紫草样品(药材、提取物、化学成分单体、含有紫草的复方中药等)各适量，用甲醇(或氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、石油醚、环己烷等有机溶剂及其不同浓度的水溶液)提取，过滤，即得；

v.测试方法：进行高效液相色谱(HPLC)分析，以圆二色谱(CD)为检测，记录色谱图；软紫草和硬紫草样品各波长处测定的液相-圆二色谱(LC-CD)色谱图中色谱峰的符号不同，具体特征如下：

在220nm，274nm，360nm和550nm处测定的液相-圆二色谱(LC-CD)色谱图，软紫草中各个色谱峰为负峰，硬紫草中各个色谱峰为正峰；

在245nm，310nm和430nm处测定的液相-圆二色谱(LC-CD)色谱图，软紫草中各个色谱峰为正峰，硬紫草中各个色谱峰为负峰。

利用圆二色色谱图中的峰的正负特性鉴定软紫草和硬紫草。

6.一种软紫草和硬紫草的液相-圆二色谱(LC-CD)鉴定方法，其特征是利用高效液相色谱(HPLC)分离出紫草中的萘醌类衍生物，再利用圆二色谱(CD)和紫外光谱(UV)同时检测，根据紫外色谱峰的峰面积计算对映异构体总含量，根据紫外色谱峰的峰面积计算对映异构体总含量，利用圆二色色谱图中的峰的正负，鉴定软紫草和硬紫草。

7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征为圆二色谱(CD)检测波长范围为：210-240nm，250-300nm，325-400nm和450-600nm，200-210nm，240-240nm，300-325nm，400-450nm；紫外光谱(UV)检测波长范围为200-300nm和400-600nm。