[发明专利]特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY及其制备方法与用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物制药技术，具体涉及一种鸡卵黄免疫球蛋白IgG（IgY）药物的制备与临床治疗耐药性白色念珠菌感染的制剂。

背景技术

近年来由于大量抗生素、激素、免疫抑制剂的应用，极易使机体内菌群失调或细胞、体液免疫应答抑制，引起白色念珠菌病，此外，烧伤、肿瘤、移植、哺乳婴儿，口腔黏膜病及爱滋病等患者，更由于其免疫功能处于低下状态，极易继发感染白色念珠菌。为此系统性念珠菌感染呈明显上升的趋势，尤以白色念珠菌感染为主，特别是耐药菌感染增多，其感染最常见部位是女性外阴及阴道，严重影响大多数被感染妇女的生殖健康、生活质量和婚姻关系。据报道，在美国所有外阴阴道炎症中，外阴阴道念珠菌病（VVC）发生率最高，约为39%，主要致病菌是白色念珠菌，占85%～90%以上；另据统计，大约3/4的育龄妇女至少患过一次VVC，其中16%发病一次，再次发病84%，再次发病者中有35%发病6次以上；随着抗真菌药物的大量使用，致病真菌的耐药现象越来越普遍，耐药程度也越来越高，耐药性产生已成为临床念珠菌治疗失败的主要原因。因此，开发特异性抗耐药白色念珠菌IgY在阴道中的免疫预防及抗菌作用的产品，对保障妇女的健康，以及对上述免疫功能低下继发感染患者的免疫预防及治疗，具有现实意义。

发明内容

本发明的目的是针对上面所述缺陷，提供一种能治疗耐药性白色念珠菌感染的特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY。

本发明的另一目的是提供一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY的制备方法与应用。

特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其制备过程包括如下步骤。

（1）制备高免疫原性耐药性白色念珠菌抗原：筛选临床耐药性白色念珠菌，经药敏试验及PCR鉴定，纯培养后调整细胞浓度为（1～5）×10^6-8CFU/ml，并将其与等浓度白色念珠菌标准株按体积比（0.5～2）∶1混合，制备出高免疫原性抗原混悬液。

（2）免疫产蛋母鸡，追踪IgY抗体效价：选用高产蛋的良种鸡，以氟氏不完全佐剂与步骤（1）所述抗原混悬液按体积比1∶1混匀后，于蛋鸡皮下多点接种进行初次免疫，共1.0ml/只，3周左右，再用步骤（1）所述抗原混悬液于蛋鸡腋静脉加强免疫1次，每次0.5ml/只，收集初次免疫1周后的鸡蛋，采用聚乙二醇法跟踪提取IgY，用ELISA法测定卵黄抗体效价，当IgY抗体效价＞1∶2000，为有效蛋。

（3）采用水稀释法制备特异性抗耐药白色念珠菌IgY：无菌取蛋黄去脂、打碎，加体积倍数为5～9倍蒸馏水稀释，用盐酸和氢氧化钠调pH至5.2，置4℃静置6h，离心取上清，超滤浓缩，56℃下灭活病毒30min，即为IgY初提物（液态），或再冷冻干燥得干粉，得到IgY初提物（固态）。

优选的，步骤（1）中所述纯培养后调整细胞浓度为3×10⁷CFU/ml，并将其与等浓度白色念珠菌标准株按体积比1∶1混合。

优选的，所述步骤（2）选用美国高产蛋的良种莱昂鸡。

优选的，步骤（2）所述IgY抗体效价＞1∶2560，为有效蛋。

优选的，所述步骤（3）中无菌取蛋黄去脂、打碎，加７倍蒸馏水稀释。

所述步骤（2）中用抗原混悬液于蛋鸡腋静脉加强免疫1次后，可再隔3周加强免疫1次。

本发明所述的特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY可采用于药剂学常规手段制备成剂型如泡腾片、栓剂、阴道海绵、洗液用于临床耐药白色念珠菌感染的治疗，特别适用于复发性白色念珠菌阴道炎的治疗。

本发明的有益效果是：鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）是一种由新鲜鸡蛋中提取的生物制品，对人体有重要的免疫保护作，以耐药性白色念珠菌为抗原免疫产蛋母鸡，应用水稀释法提取抗白色念珠菌卵黄抗体IgY，使其抗体效价＞1∶2560。IgY对热及酸碱（pH3～11）稳定性好，可抵抗胃酸屏障，并能抗胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化；对阴道黏膜无刺激，对人类无致病作用，无急性和慢性毒性作用，无致畸、致癌作用，外用或口服无不良反应。

具体实施方式

下面通过实施例进一步对本发明进行说明，但实施例不限制本发明的权利要求范围。

实施例1：特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY制备。

（1）制备高免疫原性耐药性白色念珠菌抗原：筛选临床耐药性白色念珠菌，经药敏试验及PCR鉴定，纯培养后调整细胞浓度为1×10⁶CFU/ml，并将其与等浓度白色念珠菌标准株按比例0.5∶1混合，制备出高免疫原性抗原混悬液。