[发明专利]特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY及其制备方法与用途

权利要求书

1.特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其特征在于采用包括如下步骤的制备方法制得： 

（1）制备高免疫原性耐药性白色念珠菌抗原：筛选临床耐药性白色念珠菌，经药敏试验及PCR鉴定，纯培养后调整细胞浓度为（1～5）×10^6-8CFU/ml，并将其与等浓度白色念珠菌标准株按体积比（0.5～2）∶1混合，制备出高免疫原性抗原混悬液；

（2）免疫产蛋母鸡，追踪IgY抗体效价：选用高产蛋的良种鸡，以氟氏不完全佐剂与步骤（1）所述抗原混悬液按体积比1∶1混匀后，于蛋鸡皮下多点接种进行初次免疫，共1.0ml/只，3周左右，再用步骤（1）所述抗原混悬液于蛋鸡腋静脉加强免疫1次，每次0.5ml/只，收集初次免疫1周后的鸡蛋，采用聚乙二醇法跟踪提取IgY，用ELISA法测定卵黄抗体效价，当IgY抗体效价＞1∶2000，为有效蛋；

（3）采用水稀释法制备特异性抗耐药白色念珠菌IgY：无菌取蛋黄去脂、打碎，加体积倍数为5～9倍蒸馏水稀释，用盐酸和氢氧化钠调pH至5.2，置4℃静置6h，离心取上清，超滤浓缩，56℃下灭活病毒30min，即为液态IgY初提物，或再冷冻干燥得干粉，得到固态IgY初提物。

2.根据权利要求1所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其特征在于：步骤（1）中所述纯培养后调整细胞浓度为3×10⁷CFU/ml，并将其与等浓度白色念珠菌标准株按体积比1∶1混合；所述步骤（3）中无菌取蛋黄去脂、打碎，加７倍蒸馏水稀释。

3.根据权利要求1所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其特征在于：步骤（2）所述IgY抗体效价＞1∶2560，为有效蛋。

4.根据权利要求1所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其特征在于：所述步骤（2）中用抗原混悬液于蛋鸡腋静脉加强免疫1次后，再隔3周再加强免疫1次。

5.根据权利要求1所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其特征在于：可制成包括泡腾片、栓剂、阴道海绵或洗液中的任一剂型。

6.权利要求1所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 

（1）制备高免疫原性耐药性白色念珠菌抗原：筛选临床耐药性白色念珠菌，经药敏试验及PCR鉴定，纯培养后调整细胞浓度为（1-5）×10^6-8CFU/ml，并将其与等浓度白色念珠菌标准株按体积比（0.5～2）∶1混合，制备出高免疫原性抗原混悬液；

（2）免疫产蛋母鸡，追踪IgY抗体效价：选用高产蛋的良种鸡，以氟氏不完全佐剂与步骤（1）所述抗原混悬液按体积比1∶1混匀后，于蛋鸡皮下多点接种，共1.0ml/只，3周左右，再用步骤（1）所述抗原混悬液于蛋鸡腋静脉加强免疫1次，每次0.5ml/只，收集初免1周后的鸡蛋，采用聚乙二醇法跟踪提取IgY，用ELISA法测定卵黄抗体效价，当IgY抗体效价＞1∶2000，为有效蛋；

（3）采用水稀释法制备特异性抗耐药白色念珠菌IgY：无菌取蛋黄去脂、打碎，加体积倍数为5～9倍蒸馏水稀释，用盐酸和氢氧化钠调pH至5.2，置4℃静置6h，离心取上清，超滤浓缩，56℃下灭活病毒30min，即为液态IgY初提物，或再冷冻干燥得干粉，得到固态IgY初提物。

7.根据权利要求6所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述纯培养后调整细胞浓度为3×10⁷CFU/ml，交将其与等浓度白色念珠菌标准株按体积比1∶1混合；所述步骤（3）中无菌取蛋黄去脂、打碎，加７倍蒸馏水稀释。

8.根据权利要求6所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述IgY抗体效价＞1∶2560，为有效蛋。

9.根据权利要求6所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中用抗原混悬液于蛋鸡腋静脉加强免疫1次后，再隔3周再加强免疫1次。

10.权利要求1所述的一种特异性抗耐药白色念珠菌鸡卵黄抗体IgY，其特征在于：用于临床耐药白色念珠菌感染的治疗或用于复发性白色念珠菌阴道炎的治疗。