[发明专利]抗细胞型朊蛋白单克隆抗体及其在诊断检测试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种与人体正常粘膜所分泌的天然蛋白-细胞型朊蛋白(c ellular prion protein)，相结合的单克隆抗体的杂交瘤，由该杂交瘤产生的抗细胞型朊蛋白单克隆抗体及其相应产品可应用于人结直肠肿瘤干细胞的诊断试剂或相关领域。

背景技术

朊蛋白是一种在哺乳动物中广泛存在的高度保守的糖蛋白，分细胞型(正常型)和致病型(朊病毒)两种，主要在神经系统中表达(Bueler，H.，Aguzzi，A.，Sailer，A.，Greiner，R.A.，Autenried，P.，Aguet，M.，Weissmann，C.，1993.Cell，73：1339-1347)(Klein，M.A.，Aguzzi，A.，2000.News Physiol Sci.，15：250-55)。朊蛋白N端包含与抗凋亡蛋白Bcl2类似4个八肽重复序列区域，Bounhar等人发现表达PRNP可以抑制Bax引起的人类原代神经元细胞凋亡(Bounhar，Y.，Zhang，Y.，Goodyer，C.G.，LeBlanc，A.，2001.J.Biol.Chem，276：39145-39149)。缺少GPI锚定信号肽的细胞型朊蛋白截断型也有神经元保护功能，提示细胞型朊蛋白在细胞质中发挥作用。对于突变体的功能分析发现跨膜或者分泌型的朊蛋白具有神经元胞或功能，然而特定的突变竟会导致功能丧失，也许和致病性朊蛋白相关。

相对于朊病毒的研究，细胞型朊蛋白的功能尚未得到明确的认识。朊蛋白基因敲除小鼠的研究提示细胞型朊蛋白缺失后小鼠会出现心律失常、昼夜节律改变等症状。目前已经发现细胞型朊蛋白与乳腺癌、前列腺癌、肝癌和结肠癌等多种肿瘤相关(Mehrpour，M.；Codogno，P.，2009.Cancer Lett.，290：1-23)，在胃癌和乳腺癌中细胞型朊蛋白表达与Bcl-2上调相关，参与发挥抑制细胞凋亡功能(Liang，J.；Pan，Y.L.；Ning，X.X.；Sun，L.J.；Lan，M.；Hong，L.；Du，J.P.；Liu，N.；Liu，C.J.；Qiao，T.D.；Fan，D.M.，2006.Tumour.Biol.，27：84-91)(Li，Q.Q.；Cao，X.X.；Xu，J.D.；Chen，Q.；Wang，W.J.；Tang，F.；Chen，Z.Q.；Liu，X.P.；Xu，Z.D.，2009.Cell Mol.Life Sci.，66：504-515)。细胞型朊蛋白能抵抗肿瘤坏死因子RNF-α和TRAIL引起的乳腺癌细胞凋亡(Diarra-Mehrpour，M.；Arrabal，S.；Jalil，A.；Pinson，X.；Gaudin，C.；Pietu，G.；Pitaval，A.；Ripoche，H.；Eloit，M.；Dormont，D.；Chouaib，S.，2004.Cancer Res.，64：719-727)(Meslin，F.；Hamai，A.；Gao，P.；Jalil，A.；Cahuzac，N.；Chouaib，S.；Mehrpour，M.，2007.Cancer Res.，67：10910-10919)，此外还有报道指出细胞型朊蛋白通过增加葡萄糖水平上升来促进结肠癌细胞生存(Li，Q.Q.；Sun，Y.P.；Ruan，C.P.；Xu，X.Y.；Ge，J.H.；He，J.；Xu，Z.D.；Wang，Q.；Gao，W.C.，2011.Cancer Sci.，102：400-406)。Dodelet等人报道细胞型朊蛋白对于CD34+造血干细胞的自我更新是必须的(Dodelet，V.C.；Cashman，N.R.，1998.Blood，91：1556-1561)，Weinberg的研究结果提示细胞型朊蛋白可能与乳腺细胞球状体形成相关(Liao，M.J.；Zhang，C.C.；Zhou，B.；Zimonjic，D.B.；Mani，S.A.；Kaba，M.；Gifford，A.；Reinhardt，F.；Popescu，N.C.；Guo，W.；Eaton，E.N.；Lodish，H.F.；Weinberg，R.A.，2007.Cancer Res.，67：8131-8138)。尽管以上报道提示细胞型朊蛋白可能与多种肿瘤相关，但是细胞型朊蛋白在人类肿瘤中的具体生理功能至今还不清楚，对于肿瘤发生、发展的作用机制未见报道。