[发明专利]可用于预防或治疗人溃疡性结肠炎的重组食品级乳酸菌、其制备方法与应用

权利要求书

1.一种表达含人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白的重组食品级乳酸菌，其通过下述方法制备：构建一种以α-半乳糖苷酶为抗性筛选标记的表达含人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白的重组表达载体，并转化到乳酸菌宿主细胞中。

2.根据权利要求1所述的重组食品级乳酸菌，其中所述融合蛋白由Usp45蛋白信号肽、促分泌蛋白肽以及人酸性成纤维细胞生长因子组成，其氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，所用的重组表达载体衍生于pMG36e。

3.根据权利要求1所述的重组食品级乳酸菌，其中所述的乳酸菌宿主细胞选自：乳球菌，例如，乳球菌MG1363、LM0230、MG1614、NZ9000、NZ9700、NZ9800，粪肠球菌，例如，粪肠球菌OGIX、FA2-2，或植物乳杆菌，优选乳酸乳球菌NZ9000。

4.一种制备分泌表达含人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白的重组食品级乳酸菌的方法，该方法包括以下步骤：

1)构建以α-半乳糖苷酶为抗性筛选标记的表达含人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白的重组表达载体；

2)将1)中构建的重组表达载体电转化至乳酸菌宿主细胞中，并且用含蜜二糖的乳酸菌培养基筛选转化成功的重组乳酸菌。

5.根据权利要求4所述的方法，其还包括下述步骤：

3)在适于分泌表达融合蛋白的条件下培养步骤2)中被转化的重组乳酸菌；和

4)通过3)的重组乳酸菌分泌表达出所述含人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述融合蛋白由Usp45蛋白信号肽、促分泌蛋白肽以及人酸性成纤维细胞生长因子组成，其氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，其中步骤1)中所用的重组表达载体衍生于pMG36e。

7.根据权利要求4所述的方法，其中所述的乳酸菌宿主细胞选自：乳球菌，例如，乳球菌MG1363、LM0230、MG1614、NZ9000、NZ9700、NZ9800，粪肠球菌，例如，粪肠球菌OGIX、FA2-2，或植物乳杆菌，优选乳酸乳球菌NZ9000。

8.权利要求1-3中任一项的分泌表达含人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白的重组食品级乳酸菌在制备化妆品或用于预防和治疗人溃疡性结肠炎的药物或食品中的应用。

9.一种用于预防和治疗人溃疡性结肠炎的药物或食品，其中包含有效量的权利要求1-3中任一项所述的分泌表达含人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白的重组食品级乳酸菌。

10.一种化妆品，其中包含有效量的权利要求1-3中任一项所述的分泌表达含人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白的重组食品级乳酸菌。