[发明专利]来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物

说明书

技术领域

本发明属于生物技术以及临床诊断领域；更具体地，本发明涉及来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物。

背景技术

目前诊断前列腺癌(PCa)主要的诊断标记物是PSA，但其临床诊断上存在特异性和灵敏度不高的问题，导致临床实践中面临大量不必要的活检。这些问题一方面给病人带来许多副作用，另外一方面造成医疗资源和费用的大量浪费。

早期诊断PCa、对确诊的PCa有选择地进行治疗或单纯随访观察、避免过度治疗是成功诊治PCa的关键。目前在临床上主要依靠PSA检测、直肠指检、影像学检查和组织病理检查等手段，但它们都存在一定的局限性，给早期PCa的确诊、治疗选择和预后判断带来了一定困难。例如临床上广泛应用于早期诊断PCa的标志物为PSA，但是PSA特异性和敏感性都偏低。约15％PCa患者的血清PSA在正常范围，前列腺炎和前列腺良性增生患者的PSA水平也会出现升高，而且PSA对判定PCa是否转移及预后的作用不确切。

目前对前列腺癌评价，分型和预后基本还是停留在用Nomograms上(常用的是用Partin表)，主要指标大多是临床指标，例如活检的Gleason评分，临床分期，血清中PSA水平进行综合评价。在一个大规模的研究中，研究者发现Partin表预测淋巴结侵入，储精囊侵入，前列腺胞外，或是局限在前列腺的癌症等的检测的AUC分别为0.77，0.74，0.62和0.68。因此，迫切需要寻找新的PCa标志物。

直接用血清来寻找癌症标志物，具有很大的困难，也会碰到许多挑战，即使在拥有先进质谱仪的状况下，这种挑战也仍然存在。因为血清里有几种高丰度蛋白，如白蛋白、免疫球蛋白、补体因子，它们构成血清中97％的蛋白，而生物标记物通常是表达量相当低的蛋白。血清中蛋白的表达丰度是很大的，比如白蛋白的浓度是7.5×10⁵nmol/L；而PSA浓度在3ng/ml，相当于10^-1nmol/L，这说明PSA和白蛋白之间相差7.5×10⁶倍。目前，质谱所能检测到的蛋白动态范围只有10²-10⁴，远远不够，即使利用蛋白抗体柱去除高丰度蛋白，成效仍然不明显。即使去掉99％的蛋白，它的动态范围仍然接近于10⁵。因此有必要从其他来源，寻找血清标记物。

和血液相比，作为用于前列腺癌临床诊断的样品，前列腺分泌液具有以下三方面优势：1、理论上，前列腺液中的成分比血液中的成分更能直接、真实地反映前列腺癌的病理特点。2、前列腺液的来源具有高度的前列腺特异性。因此，前列腺分泌液(Expressed Prostatic Secretions，EPS)中所有的蛋白质(哪怕它们也存在于别的器官)都具有作为前列腺特异蛋白的资格用于新的前列腺临床诊断癌标记蛋白的筛选。这无疑显著地降低了筛选新的前列腺癌标记蛋白的难度。3、那些在血液中因水平极低而不易被发现的前列腺癌标记蛋白如果也在前列腺液中存在的话，则较容易被检测出来。这一点对寻找早期前列腺癌标记蛋白无疑具有特别的意义，这是因为早期前列腺癌和晚期的相比，其体积很小，因而分泌物就更少。

本发明人在2008年率先对前列腺液进行了蛋白质组学研究和严格的过滤分析，共115种蛋白质成功地在前列腺分泌液鉴定出(Li R等，Analysis of expressed prostatic secretions reveals rich source of biomarker candidates，Proteomics Clinical Application.2008；2：543-555)。和国外不同实验室报道的前列腺癌组织转录水平的数据相比较，本发明人发现其中48种蛋白质的mRNA水平在前列腺癌组织也是增加的。随后前列腺分泌液的蛋白质组得到了更深入的研究，也有更多的蛋白质被鉴定(Drake，R.R.，et al.，Clinical collection and protein properties of expressed prostatic secretions as a source for biomarkers of prostatic disease.J Proteomics，2009.72(6)：p.907-17；Drake，R.R.，et al.，In-depth proteomic analyses of direct expressed prostatic secretions.J Proteome Res，2010.9(5)：p.2109-16.)。