[发明专利]一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于病理学领域，具体地，本发明涉及一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法。

背景技术

免疫组织化学在生物医学研究和诊断病例学中起着日益重要的作用。特别是从在上世纪90年代开始，随着高温抗原修复技术的出现，免疫组织化学在外科病理学以及其他形态学领域的应用越来越广泛。在过去的几十年里，基于抗原修复、石蜡组织切片技术、抗体识别的免疫组化技术，已成为病理学中疾病诊断不可或缺的工具。特别对癌症的诊断，免疫组化技术已经成为必须的手段，是目前临床上诊断出各种各样不同癌症主要方法。 

质量控制是检验一项产品或服务的质量的必备程序，在免疫组化的结果分析中，最关键的是如何确定阳性对照。阳性对照是整个过程的最重要的检验标准之一，通过能产生一种可测量的信号来实现，而这种信号受免疫组化过程几乎所有的组成部分、及工艺的影响。本发明涉及的内容，是对现存质量保证程序的重要补充，是一种对免疫组化测试进行质量控制的新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于免疫组化过程进行质量的阳性参照物的制备方法。

随着免疫组化技术在临床诊断和肿瘤转化研究中，尤其是在当前癌症定向治疗方法的研发中的广泛应用，医务工作者对IHC的要求越来越强烈。肿瘤标记物和作为治疗指示剂的参照物已经成为IHC标准化涉及的两个主要指标。其中，参照物的选择，需要针对每一个肿瘤标记物，创建相应的标准参照物，解决由于不一致福尔马林固定、修复条件、免疫反应引起的多变IHC染色结果的统一化，同时作为评估标本制备的质量标准。本发明中，采用多肽玻片点样矩阵模型作为参考标准，进行免疫组化质量控制标准的研究。

将可以与一抗发生特异性免疫反应的不同浓度的多肽预先共价吸附在玻片上，或是经过包埋的不同浓度的多肽石蜡切片预先放置在玻片上，用于后续放置病人的组织标本。吸附在玻片的多肽与病理组织切片，同时经历烤片、脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶的消除、封闭、一抗反应、二抗反应、显色等步骤。

特异性标记或有或无，是目前肿瘤谱鉴定的主要特征。依赖免疫组化染色结果的个性化治疗的出现，增加了阳性对照的需求。阳性对照和阴性对照物的设置，使得检测不一致性的影响最小化。在每张玻片上进行对照，可以应对虚假错误（如错误的试剂配置、试剂实效、操作失误等）发生的风险，也可有效判断由于试剂灵敏度过高引起的假阳性结果。

对同一种疾病靶位的阳性参照物（多肽），建立标准化可重复的免疫组化多肽对照，需要对已经在临床上应用的商业选定的抗体结合的靶位进行鉴别。选择的多肽表位具有与天然抗原（抗原表位）的多肽一样的结构和特性，且与抗体结合具有抗体与天然抗原结合一样的效果。使用的多肽，从结构而言，必须是天然抗原的表位，鉴别抗原表位有两个通用方法：（1）对基于天然蛋白质序列而组成的多肽进行评估；（2）对从随机组合的多肽库筛选得到的多肽进行评估。

多肽在玻片上的放置方式见图1或图2所示。将能与一抗发生免疫反应的多肽打印或手工点样在玻片上，一个浓度的多肽在玻片上经上样后形成一个小圆斑。图中的多肽，可以是相同多肽的各种不同浓度的集合组成，也可以是几种多肽不同方式的组合。

本发明的技术方案包括下列工艺步骤：

将能够与抗体发生特异性反应的多肽或蛋白，设置不同浓度预先吸附在玻片上，或是将经过包埋的不同浓度的多肽或蛋白石蜡切片预先放置在玻片上，与病理组织切片同时经历常规免疫组化步骤，多肽或蛋白的染色结果作为免疫组化过程的阳性参照物。

所述的多肽或蛋白，为病理组织切片中组织抗原的表位。

所述的多肽或蛋白预先吸附在玻片上，是以共价或物理吸附的方式，吸附在免疫组化用的玻片上。

所述的染色结果，多肽或蛋白的斑点颜色从浓度由低到高表现逐渐加深；再通过显微镜对病理组织切片进行观察，根据病理组织切片上靶位颜色与多肽或蛋白的斑点颜色的对比进行判定。

质量控制技术在临床检测应用方面十分重要，对于每种检测物的分析，至少需要一种可进行测定的对照物。对照物的对照值偏离预订的结果，意味着测定结果可能出现了错误，需要对检测结果进行重新评估。在免疫组化实验中，对于如何设定参照物，保证参照物与待测组织至于同一时间和空间范围进行检测流程，是参照物能否最大程度保证实验正确的前提条件。用可与抗体发生特异性反应的多肽作为阳性对照，在同一张玻片上与待测组织同时进行反应，可以有效应对虚假错误（如错误的试剂配置、试剂实效、操作错误）发生的风险。