[发明专利]一株海洋放线菌L131及其代谢物、代谢物的制法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是海洋放线菌L131，另外还涉及菌株代谢物的制法和在生物农药研究领域的应用。

背景技术

海洋环境占据地球总面积的70.8%，蕴含着丰富的微生物资源，海洋独特的环境特点，如低温、低营养、高压、高盐度等，造就了海洋微生物特有的代谢方式和代谢产物,放线菌因具有复杂的形态分化过程而具有合成种类丰富的次级代谢产物的能力。近年来，随着分子生物学技术的发展，越来越多的海洋放线菌被发现，许多源于海洋放线菌的次级代谢产物也被鉴定出具有抗肿瘤，抗菌，抗疟，杀虫功能以及酶抑制剂等多种生物活性功能。海洋放线菌所产生的结构新颖、功能多样的活性物质成为天然活性产物和新药开发的重要来源。

番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一。番茄叶霉病（Fulvia fulva）是威胁保护地番茄生产的一种严重病害，番茄叶霉病主要危害叶片，严重时危害茎、花、果实等。病斑多生于叶背，出现不规则形或椭圆形淡黄色退绿斑，叶背面初生霉层，以后霉层变为灰褐色或黑褐色绒状。果实染病后，在果蒂附近形成圆形黑色病斑，硬化稍凹陷，不能食用。因此，该病菌的感染可直接导致番茄减产，并严重影响番茄品质，此病一旦发生，会迅速蔓延，给番茄生产带来巨大的损失。

针对番茄叶霉病在生产上常使用化学农药进行防治，田间喷药是控制番茄叶霉病流行的重要手段，通常采用粉尘或烟雾施药和喷雾方法。粉尘施药常用的粉尘剂有5%百菌清粉尘剂、5%加瑞农粉尘剂、7%叶面净粉尘剂、25%斯克WP等，常用的烟剂有45%百菌清烟剂。喷雾施药多用2%武夷霉素水剂150 倍液、50%多菌灵可湿性粉剂500 倍液、70%甲基托布津可湿性粉剂800-1000 倍液、47%加瑞农可湿性粉剂600-800 倍液等。化学药剂的防治效果明显，防治速度快，但长期使用会使对化学药剂的依赖性越来越大，田间一个生长季节用药次数不断增加，使病原菌对使用农药抗药性不断增强，防治效果不断下降，同时药剂残留还会造成环境的污染，影响人类的健康。因此，必须探索新的高效安全防治途径。

近年来，生物防治研究逐渐成为热点，生物防治的应用日益成为综合治理植物病虫害的重要手段，但目前获得的高效、低毒、低残留的抗真菌类抗生素仍然较少，因此新的抗真菌类抗生素及高效的发酵工艺，将成为保护生态环境，实现农业可持续发展的有力保证。

发明内容

本发明的目的在于提供一株海洋放线菌链霉菌（Streptomyces sp.）L131，其代谢物具有显著的抑制番茄叶霉菌的作用，公开了代谢物的制备方法，及在生物防治农药中的应用。

本发明的一株海洋放线菌链霉菌株是从辽宁大连小平岛海泥样品中分离得到的链霉菌L131，其在Bennett培养基上生长良好，菌落凸起，表面褶皱，有白色孢子，产淡黄色可溶性色素；

所述Bennett培养基的组成为：葡萄糖10 g，蛋白胨2 g，酵母粉1 g，牛肉膏1 g，琼脂15 g，蒸馏水1L，pH 7.2，121℃湿热灭菌20min。

所述海洋链霉菌L131代谢物，通过下述制备方法制得：

（1）链霉菌L131的发酵

A、链霉菌L131种子液的制备：将平板上的菌丝和孢子接入YMG培养基中，30℃，150 rpm培养24 h得到种子液；

B、链霉菌L131的发酵：将链霉菌L131种子液以2%的接种量接入优化的发酵用培养基中，30℃，150 r/min条件下培养168 h；

所述的YMG培养基组成：葡萄糖4 g,麦芽提取物10 g,酵母提取物4 g,蒸馏水l L,pH 5.5±0.2；优化的发酵用培养基组成：玉米粉15 g，黄豆粉15 g，酵母浸膏1.5 g，CaCO₃ 0.5 g，水定容至1L，121℃湿热灭菌20 min；

（2）链霉菌L131对真菌具有抑制作用的的代谢物的制备

将发酵液离心，6000 r/min离心10 min，取离心后的上清液与预处理后的大孔吸附树脂AB-8以10:3(v:m)比例混合，置于摇床150 r/min吸附24 h，然后分别用等体积蒸馏水，40%甲醇清洗，使用等体积100%甲醇解吸，150 r/min解附24 h，解吸液使用真空旋转蒸发仪35℃蒸干，再以少量体积甲醇将剩余物重新溶解浓缩，其为链霉菌L131的代谢物。

所述海洋链霉菌（Streptomyces）L131的代谢物在植物病害生物防治的农药中的应用。