[发明专利]一种人脐带间充质干细胞分离培养方法

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取足月剖宫产胎儿脐带，无菌条件下用PBS冲洗，去除残留血迹；

(2)在动物细胞培养基中用无菌剪刀将步骤(1)中洗净的脐带剪成组织块，去除组织块的血管并将组织块弄碎；

(3)将步骤(2)中弄碎的组织块置于离心管中与动物细胞培养基充分混合振荡后离心，离心机速度为1600～2200转/分钟，离心5～10分钟弃去上清，重复2～4遍；

(4)将离心沉淀部分与配置好的MesenCult-XF完全培养基混合震荡均匀种植于细胞培养皿中，并置于37℃，5％CO₂培养箱中培养；

(5)培养第5天，将组织块全部吸出弃去，补加MesenCult-XF完全培养基，且显微镜下观察到贴壁的梭形或多边形的细胞，之后每隔3天更换一次培养基，继续培养。

2.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中所用的动物细胞培养基为RPMI MEDIUM 1640培养基或者DMEM培养基。

3.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中将组织块弄碎的方法为剪碎或者使用组织块匀浆机直接绞碎。

4.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中所用的动物细胞培养基为RPMI MEDIUM 1640培养基或者DMEM培养基。

5.根据权利要求1所述人脐带间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述步骤(4)和步骤(5)中的MesenCult-XF完全培养基的组成为20％MesenCult-XFSupplement+80％MesenCult-XF Basal Medium+2mM L-Glutamine。

6.根据权利要求1所述人脐带间充质干细胞分离培养方法，其特征在于：在所述步骤(5)之后，还包括步骤(6)：培养第12～15天，细胞约80％融合，以MesenCult-XF Enzymatic Dissociation Solution消化，并以MesenCult-XFEnzymatic Inhibition Solution终止消化，按1∶3传代，之后每3天传一代，最终得到充足的间充质干细胞。