[发明专利]一种地锦草提取物、制备工艺及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种地锦草提取物、制备工艺及其应用，属于天然药物化学领域。 

背景技术

地锦草为大戟科植物地锦草或斑地锦干燥的全草，为多年生草本植物，具有清解毒、利湿退黄、活血止血、抗病原等功能。现代研究表明，地锦草主要含可水解性鞣质类和槲皮素、山萘素等黄酮类化合物；药理研究证明其具有抗菌、抗病毒、抗氧化、护肝、止血等生物活性。 

目前地锦草的提取均采用普通的水提醇沉或单纯的醇提，其鞣质、脂溶性杂质较多、纯度低，干燥后提取物的引湿性过大。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的地锦草提取物制备工艺，经该工艺制备的提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。 

本发明采用的技术方案是：地锦草提取物的制备工艺，其特征是，依次包括以下步骤： 

(1)取地锦草，加入70％的乙醇回流提取2次，每次3小时，70％的乙醇加入量每次为地锦草质量的8倍； 

(2)合并两次提取液，然后将提取液加入到浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90±1℃进行浓缩，至浓缩液相对密度为1.025； 

(3)将浓缩液置聚酰胺柱上，分别用水，30％乙醇，50％乙醇梯度洗脱， 每个梯度洗脱至无色；收集50％乙醇洗脱液置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90±1℃，浓缩至相对密度为1.025； 

(4)将浓缩后的50％乙醇洗脱液送入喷雾干燥器，控制容器内进风口温度为180±5℃，出风口温度为60～70℃，进行喷雾干燥得到便于存放的地锦草提取物。 

上述乙醇的百分数均为重量百分数。 

上述工艺制得的地锦草提取物的主要成分及含量为：总黄酮(槲皮素、山萘素、异黄酮、双黄酮、查尔酮等)含量为24～27wt％，其中以槲皮素为主，地锦草提取物中槲皮素含量为12～14wt％。 

该提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。 

本发明的有益效果是：经聚酰胺柱洗脱后得到的产品，去除了可消解性鞣质成分，使最终的提取物得到了纯化，为产品进行下一步的开发应用奠定了坚实的基础。经实验证明本工艺制备的地锦草提取物具有良好的抑制耐药性禽源大肠杆菌的作用。 

具体实施方式

实施例1 

1、仪器与材料 

地锦草购自济南市建联中药有限公司中药饮片厂，产地为山东。 

聚酰胺柱40cm×200cm     制造厂家天津阿托兹精细化工有限公司 

实验菌种：来自临床经鉴定具有耐药性的禽源大肠杆菌 

2、地锦草提取物制备 

取地锦草药材50kg，置提取罐内，加入70％乙醇400Kg，加热回流3小 时，滤过，滤渣加入70％乙醇400Kg，加热回流3小时，滤过，滤液合并，置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90±1℃，浓缩至相对密度为1.025，放冷。 

将浓缩液置40cm×200cm聚酰胺柱内，调节洗脱液流速为5L/min，用水洗脱至无色(5小时)，再用30％乙醇洗脱至无色(4小时)，然后用50％乙醇洗脱至无色(5小时)，收集50％乙醇洗脱液置浓缩罐中，控制浓缩罐内温度为90±1℃，浓缩至相对密度为1.025，放冷。 

将浓缩后的50％乙醇洗脱液送入喷雾干燥器内，控制容器内进风口温度为180±5℃，出风口温度为60～70℃，进行喷雾干燥，得喷干粉2kg。 

上述乙醇的百分数均为重量百分数。 

3、地锦草提取物抑菌实验 

3.1药液制备：用10g提取物，加入100ml无菌蒸馏水，搅拌，3000转/min离心，去除不溶物，高压灭菌，即得。 

3.2细菌悬液的制备：用接种环将耐药大肠杆菌接种于营养琼脂斜面培养基，37℃培养24小时，传种于无菌肉汤培养基中，经18小时培养，再传种于无菌肉汤培养基中培养6小时，将菌液浓度做1∶100稀释 

3.3抑菌实验：取无菌小试管，每管加肉汤培养基1ml。取药液1ml加入第1管，混匀后取1ml加入第2管，第1管补加肉汤培养基1ml，第2管混匀后取1ml加入第3管，第2管补加肉汤培养基1ml，如此连续稀释至第10管，从第10管取出1ml弃掉，第11管用2ml肉汤培养基做对照，这样1～10管为倍比稀释的药液(按提取物折算即1∶40，1∶80......1∶20480)。第1～9和第11管每管各加菌液0.05ml，第10管不加菌液。将所有试管充分混匀，置37℃培养24小时，观察结果。