[发明专利]一种提高樟芝活性产物产量的固态培养方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种提高樟芝活性产物产量的培养方法，尤其是一种通过两阶段温度控制固态发酵提高樟芝代谢产物Antrodins和Antroquinonol的方法。

技术背景

    樟芝（Antrodia camphorata）是我国台湾特有的珍稀药用真菌，又名牛樟菇、牛樟芝，属于担子菌纲、非褶菌目、多孔科、多年生担子菌，生长在台湾地区的牛樟树腐朽树干的内壁。樟芝成分复杂，含有三萜、甾醇、腺苷、多糖、酚类物质等多种活性成分。在民间，樟芝长久以来被用作解救保肝的传统药，用于治疗肝脏疾病，食物和药物所引起的中毒症状以及腹泻，腹痛，高血压，皮肤发痒和肿瘤疾病等。近年来，不少学者研究显示樟芝具有抗癌、保肝、抗炎、抗DNA损伤等生理活性功能。在市场上，樟芝野生子实体售价高达15000美元/公斤，远高于灵芝、人参、冬虫夏草等传统药材，樟芝越来越受大众的关注。

现代研究表明，樟芝活性成分在保肝、抗癌等方面拥有非常良好的效果。民间视樟芝为保肝良药，传说台湾原住民因嗜酒而肝病比例偏高，服用樟芝煎液后肝脏健康状况则大为改善。樟芝菌丝体的乙醇萃取物对野生型和拉米夫定抗性突变株HBV病毒均显示良好的效果。无论体内还是体外实验，樟芝子实体和菌丝体都表现出良好的抗癌活性。Madamanchi等研究显示樟芝子实体的CHCl₃/MeOH 提取物对P-388鼠细胞具有显著的细胞毒素作用，EC50为4.1 μg/mL。樟芝子实体的乙酸乙酯萃取物对癌细胞系Hep G2、Hep 3B、PLC/PRF/5显示出良好的凋零作用。

实验表明，樟芝固态发酵菌体所含有的特征活性成分为Antrodins和Antroquinonol。Nakamura等人从樟芝液态发酵菌体中分离得到五种新的马来酸和琥珀酸衍生物（Antrodin A-E），是液态发酵樟芝菌体中的主要活性成分，具有显著的抗肝炎活性，其中Antrodin B和Antrodin C对LLC癌症细胞具有良好的抑制效果。Phuong研究结果显示樟芝菌丝体中含有的Antrodin A-E对HCV病毒都具有很好的抑制活性，其中Antrodin A抑制能力最高；研究同时发现在体内Antrodin C可以转化为Antrodin A，从而展现良好的保肝活性。樟芝菌体中的Antrodins类化合物是自1968年发现飞水蓟素之后，保肝活性最好的天然产物。Lee等人用正己烷萃取樟芝固态发酵粉末，得到一个新化合物(Antroquinonol)，属于泛醌类化合物，实验表明对乳腺癌、肝癌和前列腺癌等多种癌细胞具有良好的抗癌效果，同时具有抑制HBsAg和HBeAg合成的潜力，从而抑制HBV的复制。

公开号为CN137908（发明名称：樟芝的固体培养方法，所得固体培养物及其产品与用途）、CN101803534A（发明名称：一种樟芝的大规模固体培养方法）等专利文献公开了一系列樟芝固态培养的方法，但是上述文献所用的技术均为太空包固体培养法，得到的产品是樟芝子实体，培养周期较长，并没有关于樟芝固态发酵特征药用成分Antrodins和Antroquinonol生产方法的报道。。

在CN101151957，黄等人揭示一种以固态培养基培养樟芝的方法，首先在PDA斜面培养基上预培养樟芝菌体，取出一部分培养出的樟芝并将其接种在一液态培养基中。之后，将液态培养基中的樟芝接种到固态培养基中培养。固态培养基主要由米、琼脂、一种碳源、一种氮源、无机盐等组成。在CN101151957，此方法可以大规模的得到樟芝菌体混合物，并且具有与野生樟芝子实体类似的生理活性。但是，该方法所公开的产物为樟芝固态发酵菌体混合物，并没有关于樟芝固态发酵特征药用成分Antrodins和Antroquinonol生产方法的报道。

由于富含生理活性物质的樟芝产品的需求与日俱增，急需一种特殊的大规模人工培养樟芝的方法，该方法可以有针对性地提高樟芝特征活性产物Antrodins和Antroquinonol类化合物的含量，以提高樟芝产品品质，满足市场的不断更新发展。而根据我们查新报告表明，目前并没有关于樟芝特征活性产物Antrodins和Antroquinonol的培养方法及过程优化的报道。