[发明专利]miRNA-106a及其抑制剂在制备胶质瘤干细胞侵袭调控剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，特别涉及胶质瘤干细胞侵袭行为调控的调控剂。

背景技术

恶性胶质瘤(glioblastoma，GBM)是中枢神经系统最常见的原发性恶性脑肿瘤。肿瘤细胞的侵袭性生长是恶性胶质瘤的重要生物学特性，这种侵袭特性使得手术难以彻底切除肿瘤组织，而且化疗和放疗效果差，术后复发率高，预后不佳。恶性胶质瘤的侵袭性生长和治疗抵抗机制尚不清楚。

最近大量的研究表明，肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)在肿瘤发生与发展中发挥重要作用。研究发现恶性胶质瘤中存在胶质瘤干细胞(glioma stem cells，GSCs)，这些GSCs具有自我更新能力、多向分化潜能以及形成肿瘤的能力。同时发现，GSCs具有高侵袭力，然而具体的分子机制不明。

microRNA(miRNA)是一类新近发现的长度约为21～23个核苷酸的非编码单链小分子RNA，通过调节靶基因的表达在发育和疾病中参与了增殖、迁移、分化和凋亡等生理性和病理性过程。越来越多的证据显示不同类型的miRNA参与了调控肿瘤的发生及转移。此外，目前已有研究发现CSCs中miRNA的表达谱与正常干细胞中的不同，并在肿瘤的诊断、治疗和预后中具有重要意义。miRNA的表达可能参与了恶性胶质瘤侵袭的调控，但是和GSCs生物学行为之间的关系还需要进一步深入研究。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种胶质瘤干细胞侵袭的促进剂，该促进剂为制备胶质瘤干细胞侵袭模型提供了有效的途径。

miRNA-106a在制备胶质瘤干细胞侵袭促进剂中的应用。

进一步，miRNA-106a在制备TIMP-2抑制剂中的应用。

进一步，miRNA-106a在制备MMP2促进剂中的应用。

进一步，miRNA-106a在制备MMP9促进剂中的应用。

本发明的目的之二在于提供一种胶质瘤干细胞侵袭的抑制剂，该抑制剂为治疗胶质瘤提供了新思路。

为实现上述方案，本发明的技术方案为：

miRNA-106a的抑制剂在制备胶质瘤干细胞侵袭抑制剂中的应用。

进一步，所述miRNA-106a为TIMP-2的抑制剂。

进一步，所述miRNA-106a为MMP2促进剂。

进一步，所述miRNA-106a为MMP9促进剂。

进一步，所述miRNA-106a的抑制剂为Anti-miR miRNA-106a inhibitors。

上述技术方案是通过如下方法得到的：首先分离了人胶质瘤细胞系U87和原代胶质瘤标本来源的CD133⁺胶质瘤细胞(glioma cells，GCs)，并通过鉴定证实了人胶质瘤细胞系U87和原代胶质瘤标本来源的CD133⁺胶质瘤细胞具有GSCs特性；然后，根据miRNA芯片结果(miRCURY LNA^TM microRNA array(v.10.0)，丹麦Exiqon Life Sciences公司)发现了两个功能性的miRNA，其中一个为miRNA-106a，检测了miRNA-106a和TIMP-2通路在GSCs和GCs中的表达；最后，通过研究miRNA-106a对TIMP-2的直接调控作用并证明这是miRNA-106a促进GSCs侵袭的重要机制。

本发明的有益效果在于：分离得到的CD133⁺细胞具有自我更新、多向分化潜能、形成肿瘤等的生物学特性；证明GSC较胶质瘤细胞(GC)具有高侵袭性；miRNA-106a在GSC中的表达显著高于GC(P＜0.05)，TIMP-2无论mRNA水平还是蛋白水平在GSC中的表达显著低于GC(P＜0.05)；miRNA-106a的抑制剂可以明显抑制GSC的侵袭能力(P＜0.05)；抑制miRNA-106a的表达后，TIMP-2mRNA水平和蛋白水平的表达显著升高(P＜0.05)，荧光素酶报告基因实验证实miRNA-106a不仅可以负调控TIMP-2的表达，而且是通过和TIMP-2的3’UTR相结合的方式直接调控TIMP-2的表达。所以，GSCs具有高侵袭特性，发现miRNA-106a高表达促进了GSCs的侵袭性，其机制至少是通过下调TIMP-2、上调MMP2和MMP9表达而实现的。

附图说明

图1为人胶质瘤细胞系U87和原代胶质瘤标本来源的GSCs的分离流式细胞结果图。