[发明专利]用于干细胞富集的切向流过滤装置和方法

权利要求书

1.一种从来自受试者的样品分离干细胞的方法，其中该样品包含干细胞和非干细胞成分，该方法包括通过下列步骤在切向流过滤装置上分离：

(i)将样品通过去除装置(1)中的入口(6)引入包括交叉流室(3)的去除装置；

(ii)使样品经受与具有约1至约10微米孔径大小的过滤器(5)基本上平行的交叉流；

(iii)液体通过过滤器经受过滤；和

(iv)从样品中选择性除去非干细胞成分，形成富含干细胞的细胞群体。

2.根据权利要求1的方法，进一步包括：用白细胞提取法、密度离心、差异裂解法、过滤或暗黄覆盖层的制备从受试者制备样品，用于引入去除装置。

3.根据权利要求1的方法，其中样品是骨髓、组织悬液、器官悬液或血液成分。

4.根据权利要求1的方法，其中非干细胞成分是基质、红细胞、血浆和血小板。

5.根据权利要求1的方法，进一步包括重复步骤(i)、(ii)和(iii)至少两次以形成富含干细胞的细胞群体。

6.根据权利要求1的方法，其中干细胞是造血干细胞、间充质干细胞或多能干细胞。

7.根据权利要求5的方法，其中造血干细胞是CD34⁺细胞。

8.根据权利要求3的方法，其中干细胞是造血干细胞、间充质干细胞或多能干细胞。

9.根据权利要求8的方法，其中造血干细胞是CD34⁺细胞。

10.根据权利要求1的方法，其中通过给予干细胞动员剂，该受试者已经历干细胞动员。

11.根据权利要求10的方法，其中干细胞动员剂是M-CSF、G-CSF、GM-CSF或环磷酰胺。

12.根据权利要求1的方法，其中切向流过滤装置具有提供样品进入交叉流室入口的预定进料速度的单元；控制通过过滤器和进入滤液室的过滤速度的单元；并且其中过滤速度控制单元将过滤速度限制于小于过滤器无压迫的过滤速度。

13.根据权利要求1的方法，其中样品被预处理以诱导与干细胞基本上相同大小的细胞群体的细胞皱缩。

14.根据权利要求13的方法，其中基本上相同大小的细胞群体是粒细胞。

15.根据权利要求13的方法，其中预处理包括使细胞接触包含二甲基亚砜(DMSO)的生理学可接受溶液。

16.根据权利要求15的方法，其中DMSO终浓度在5％和20％之间。

17.根据权利要求16的方法，其中DMSO终浓度在10％和15％之间。

18.根据权利要求17的方法，其中DMSO终浓度是12.5％。

19.根据权利要求17的方法，其中DMSO终浓度是15％。

20.根据权利要求15的方法，其中生理学可接受溶液是低离子强度的。

21.根据权利要求13的方法，其中预处理包括使细胞接触包含甘油的生理学可接受溶液。

22.根据权利要求21的方法，其中甘油终浓度在0.5mol/L和2.5mol/L之间。

23.根据权利要求21的方法，其中甘油终浓度是1mol/L。

24.根据权利要求14的方法，其中通过裂解从细胞混合物中优先除去粒细胞。

25.根据权利要求24的方法，其中裂解是通过使样品顺序接触有效量的DMSO和甘油来进行的。

26.根据权利要求25的方法，其中样品接触的是具有低渗透强度的溶液。