[发明专利]一种同时测定血液及组织中三种抗结核药物含量的方法

说明书

所属领域： 

本发明是属于一种同时测定中三种抗结核药物(异烟肼，利福平，吡嗪酰胺)含量的方法，具体地说是一种涉及高压液相色谱法同时测定血液及组织中三种抗结核药物含量的方法。 

背景技术：

异烟肼(Isoniazid)，利福平(Rifampicin)，吡嗪酰胺(Pyrazinamide)仍是当今广泛使用的一线抗结核药物，异烟肼具有神经毒性，利福平具有肝毒性因此对抗结核药物进行浓度监测具有十分重要的临床意义。这三种药物的理化性质截然相反，异烟肼和吡嗪酰胺为强极性物质，且水溶性大，而利福平为弱极性物质，脂溶性大，因此要在一个色谱条件下将三种药物完全分离开有一定的困难。已有的监测方法主要采用磷酸盐缓冲液作为流动相，采用不同的色谱柱(C8柱和C18柱)在不同的色谱条件下分别检测这三种药物的含量，或将其中的部分药物预先进行衍生化再进样监测。此类方法工艺较为繁琐复杂，对实验室条件要求较高，需要多次重复检测，出检测报告的时间也较长，对样本量的要求亦较大，增加了临床检测的难度。 

发明内容：

本发明的目的就是提供一种操作简便，精确度高，检测速度快，稳定可靠，能够同时测定三种抗结核药物含量的方法。 

发明的检测方法包括如下步骤： 

(1)样品处理 

血液样本采用(4000转/分钟)离心15分钟后取血浆，组织样本加入生理盐水采用均质器捣碎后(4000转/分钟)离心，加入提取液进行提取。 

(2)色谱条件 

流动相为0.02mol/L，庚烷磺酸钠溶液(稀磷酸调pH至3.0)-乙腈-甲醇，流动相使用前过滤后超声15分钟，脱气。 

(3)样品分析 

采用日本岛津公司高效液相色谱仪(LC2010C)，AT-130柱温控箱，Lc-solution型色谱工作站。色谱柱为分析柱：shim-pack HRC-C8(250mm×4.6mm，5μm)，保护柱：Eclipse XDB-C18(125mm×4.6mm)，柱温25C°。 

(4)建立标准曲线 

将空白血浆加入标准品溶液后稀释成含INH、RPF、PZA分别为0.1、0.2、0.4、1、2、4、8、16μg/ml 的标准血浆，以三种药物的峰面积为X轴、三种药物的浓度为Y轴作线性分析。 

得三种药物的回归方程： 

Y_异烟肼＝2370.46X+1282.66 

Y_吡嗪酰胺＝86447.8X+5195.94 

Y_利福平＝3007.2X+3714.58 

将样本进样后的色谱图药物峰面积带入到以上公式中，即可计算出药物浓度。 

本发明的优点为： 

1.广泛适用性：本色谱法不仅可以用于血液，还可以用于人体其他体液和组织等生物制剂样本内三种抗结核药物含量的检测，乳唾液，尿液，脑脊液，精液等。只要能够在液体状态能够中分离出来的组织均可以进行检测，可为临床血药浓度的检测，药代动力学的研究，用药方案的调整等提供可靠的检测手段。因此广泛适用性是本色谱检测方法具有深远的前景。 

2.样本处理的简便性：本色谱方法对样本的处理及其简单，无需进行预先的衍生化。血液制剂直接离心后取血清用提取液进行提取，组织样本采用匀质器捣碎后离心，取上清液用提取液进行提取。方法简单，处理时间短，便利易行。 

3.检测过程快速：本色谱方法采用梯度洗脱的方法对样本进行检测，能够一次进样同时检测样本中三种药物的浓度，耗时短，保留时间小于三十分钟，即一次进样三十分钟内就可得出检测结果。同时因为一次进样即可检测出三种药物含量，相比多次进样分别检测三种药物对检测样本的消耗也大大降低。 

4.检测结果精确而稳定：本色谱方法精密度稳定(吡嗪酰胺：8.4％，异烟肼：10.1％，利福平：9.5％.)，回收率高(吡嗪酰胺：83.7％，异烟肼：86.2％，利福平：88.1％.) 

实施例1 

1.1检测样品是血液 

1.2色谱条件：