[发明专利]一种同时测定血液及组织中三种抗结核药物含量的方法

权利要求书

1.一种高压液相色谱法同时测定血液及组织中三种抗结核(异烟肼，利福平，吡嗪酰胺)药物含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)样品处理

血液样本采用(4000转/分钟)离心15分钟后取血浆，组织样本加入生理盐水采用均质器捣碎后(4000转/分钟)离心，加入提取液进行提取。

(2)色谱条件

流动相为0.02mol/L，庚烷磺酸钠溶液(稀磷酸调pH至3.0)-乙腈-甲醇，流动相使用前过滤后超声15分钟，脱气。

(3)样品分析

采用日本岛津公司高效液相色谱仪(LC2010C)，AT-130柱温控箱，Lc-solution型色谱工作站。色谱柱为分析柱：shim-pack HRC-C8(250mm×4.6mm，5μm)，保护柱：Eclipse XDB-C18(125mm×4.6mm)，柱温25℃。

(4)建立标准曲线

将空白血浆加入标准品溶液后稀释成含INH、RPF、PZA分别为0.1、0.2、0.4、1、2、4、8、16μg/ml的标准血浆，以三种药物的峰面积为X轴、三种药物的浓度为Y轴作线性分析。

得三种药物的回归方程：

Y_异烟肼＝2370.4X+1282.66

Y_吡嗪酰胺＝86447.8X+5195.94

Y_利福平＝3007.2X+3714.58

将样本进样后的色谱图药物峰面积带入到以上公式中，即可计算出药物浓度。

2.根据权利要求1所述高压液相色谱法同时测定血液及组织中三种抗结核药物含量的方法，其特征在于提取液采用(二氯甲烷∶异丙醇＝1∶1)配置，进行提取。

3.根据权利要求1所述高压液相色谱法同时测定血液及组织中三种抗结核药物含量的方法，其特征在于流动相的比例为(78∶5∶17)6min，(20∶5∶75)16min，(78∶5∶17)27min，采用梯度洗脱的方法，流速为0.8ml/min。

4.根据权利要求1所述高压液相色谱法同时测定血液及组织中三种抗结核药物含量的方法，其特征在于测试波长PZA：268nm，INH：264nm，RFP：254nm。流速为1.5毫升/分钟，进样体积为20微升进行色谱分析。