[发明专利]钠钾ATP酶DR区特异性抗体制备方法及其治疗肾脏缺血再灌注损伤中的药物作用

说明书

技术领域：

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及肾脏缺血再灌注的生物医药领域。 

背景技术：

缺血再灌注损伤是移植器官早期无功能及长期存活的主要因素 

机体组织器官正常代谢、功能的维持，有赖良好的血液循环。各种原因造成的局部组织器官的缺血，常常使组织细胞发生缺血性损伤。缺血后再灌注具有两重性，多数情况下，缺血后再灌注使组织、器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复。但是有时缺血后再灌注，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构的损伤，这种现象称为缺血再灌注损伤。该概念首先由詹尼斯于1960年提出。缺血再灌注损伤在许多重要器官包括心、肝、肺、肾、胃肠道等均可发生。 

肾脏为高灌注器官，对缺血及缺血再灌注均敏感，心脏也是高灌注器官，但是心脏和肾脏在人体的功能不一样，心肌细胞和肾小管上皮细胞的功能以及细胞内代谢过程有很大区别，目前的研究中在这两种脏器之间转用的难度非常大，心脏移植以及肾脏移植有很大的区别，心脏移植的排斥反应远比肾脏移植少。肾缺血再灌注损伤是缺血 性急性肾功能衰竭的重要损伤环节，也是肾移植中影响移植肾早期功能恢复及长期存活的主要因素。肾缺血再灌注损伤损伤的病理生理机制非常复杂，至今尚未彻底阐明。已知至少有3种因素参与：活性氧、中性粒细胞、补体系统。此外，活化的内皮细胞所产生的黏附分子、细胞因子、血小板活化因子、白介素、P选择素、内皮素等在肾缺血再灌注损伤中也发挥着重要作用。 

目前防治肾缺血再灌注损伤的措施虽功不可没，但急需改进 

迄今为止，对于缺血/再灌注损伤的研究，绝大部分是在实验动物身上进行的，然而这些实验资料却已经为缺血再灌注损伤的临床防治提供了重要的启示和借鉴，为临床研究奠定了重要的基础。目前，值得临床上参考的防治措施有：1.尽早恢复血流，尽量减少缺血时间。2.注意再灌注时的低流、低压、低温。低流低压的意义在于使灌注氧的供应不至突然增加而引起大量氧自由基的形成；低温则是使缺血器官代谢降低，代谢产物聚积减少。3.改善缺血组织的代谢。缺血组织有氧代谢代下，酵解过程增强，因而补充糖酵解底物如磷酸己糖有保护缺血组织的作用；外源性三磷酸腺苷(ATP)作用于细胞表面与ATP受体结合，或使细胞膜蛋白磷酸化，有利于细胞膜功能恢复，并可穿过细胞膜进入细胞直接供能；针对缺血时线粒体损伤所致的氧化磷酸化受阻，可以应用氢醌、细胞色素C等进行治疗，以加强烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)-黄素蛋白-细胞色素链的功能，延长缺血组织的可逆性改变期限。实验证明，细胞色素C能增加线粒体的二磷酸腺苷 (ADP)磷酯化；醌类化合物则能加速电子传递或将电子直接传递给氢。4.清除自由基。实验证明，外源性超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇(allopurinol)、维生素E、维生素C、过氧化氢酶、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)等自由基清除剂对缺血/再灌注损伤的心肌有防护作用。例如，外源性SOD能显著地降低缺血所致的血管通透性增高。预先用SOD给动物作静脉内注射，然后进行肠管缺血实验，则血管通透性无大变化。又如，在氧自由基中起主要作用的是继发于O^2-的OH.。如预先用OH.清除剂DMSO处理肠管，可以明显地减轻缺血所致的血管通透性增高。 

近年来，越来越多的研究发现，一些与细胞存活相关的激酶如Akt激酶，ERK激酶，PKCε激酶等，在被激活的情况下可以对缺血再灌注损伤有一定的保护作用。有研究者发现缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡，Akt活性降低及GSK-3β活性升高，影响半胱天冬酶3(Caspase3)依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一。重组人红细胞生成素(rHuEPO)可通过增强Akt活性，降低GSK-3β及半胱天冬酶3酶活性，减少细胞凋亡，对人肾小管上皮细胞系(HK-2)缺血再灌注损伤有一定的保护作用。本项目组在以往的工作中发现ERK激酶，PKCε激酶的活化对心肌细胞及神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的缺血再灌注损伤以及其它药物导致的损伤有一定的保护作用。因此，开发活化细胞信号传导通路中细胞存活相关激酶的生物制品药物，来优化防治肾缺血再灌注损伤的措施具有非常广阔的应用前景。 

钠钾ATP酶DR区特异性抗体在缺血再灌注损伤中的保护作用