[发明专利]同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法

权利要求书

1.一种同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将ZEN半抗原分别与BSA和OVA偶联，得到偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；将FB1半抗原分别与KLH和OVA偶联，得到FB1-KLH和FB1-OVA；

步骤二，分别用ZEN-BSA和FB1-KLH作为免疫原，采用常规方法制备抗ZEN的单克隆抗体和抗FB1的单克隆抗体；

步骤三，制备胶体金，用该胶体金分别标记抗ZEN的单克隆抗体和抗FB1的单克隆抗体；将标记后的单克隆抗体喷涂到金标垫上；

步骤四，在硝酸纤维素膜上进行ZEN-OVA、FB1-OVA、兔抗鼠二抗的点样，之后将硝酸纤维素膜放入牛血清白蛋白溶液中封闭，干燥；

步骤五，将金标垫，点样后的硝酸纤维素膜，样品垫和吸收垫组装成试纸条；

步骤六，将待测样品用甲醇提取，离心，取上清，将上清滴入试纸条的样本槽中，获取硝酸纤维素膜上各点样条带的显色结果，鉴定，得到结果。

2.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于， 步骤三中，所述胶体金为40nm的胶体金。

3.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，步骤三中，所述制备胶体金包括如下步骤：将100体积的0.005%HAuCl₄溶液加热至沸腾，之后加入0.5～1体积的1%柠檬酸三钠水溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100体积，制备得到40nm的胶体金溶液；所述百分数为质量体积百分数。

4.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，步骤三中，所述抗ZEN的单克隆抗体和抗FB1的单克隆抗体在被标记之前经过透析除盐处理。

5.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，步骤三中，所述标记包括如下步骤：在搅拌的条件下，向胶体金溶液中加入单克隆抗体，使其终浓度达到4ug/mL，25℃下孵育5min，用0.1mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液的pH为9.0，然后加入10%BSA至BSA的终浓度为0.1%，10000rpm离心20min，弃上清，再用0.01mM pH为9.0的 Tris缓冲液恢复，重复1次，之后将沉淀重悬于原体积的1/10的0.01mM pH为9.0的Tris缓冲液中，最后加入10%BSA至BSA的终浓度为0.1%，即完成标记；所述百分数为质量体积百分数。

6.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，步骤三中，所述喷涂为：将标记过的抗ZEN的单克隆抗体与标记过的抗FB1的单克隆抗体按浓度比为1:1进行混合，之后喷涂到金标垫上。

7.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，步骤三中，所述金标垫使用前进行如下处理：经PBS缓冲液浸泡30分钟，取出后，真空干燥，待用。

8.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，步骤四中，所述点样为：沿着硝酸纤维素膜层析的方向依次将稀释后的FB1-OVA、稀释后的ZEN-OVA、兔抗鼠二抗各喷涂为一线性条带，各条带之间保持间距。

9.如权利要求8所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，所述稀释为用含甲醇的PBS溶液进行稀释，所述PBS溶液浓度为0.05M，pH为7.4。

10.如权利要求1所述的同时检测玉米赤霉烯酮与伏马毒素的方法，其特征在于，

步骤五中，所述样品垫使用前进行如下处理：经硼酸盐缓冲液浸泡30分钟，取出后，真空干燥，待用。