[发明专利]检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法及乳或乳制品中氯霉素检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测乳及乳制品中抗生素含量的方法，尤其涉及一种检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法，还涉及一种乳及乳制品中氯霉素残留量的检测方法。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)属氯霉素类抗生素（Chloramphenicols，CAPs），是兽医临床常用的抗生素，其主要毒副作用是抑制造血机能，会引起不可逆转的再生障碍性贫血。

目前为了检测乳或乳制品中的氯霉素，通常的预处理方法是利用固相萃取方法，用以提取和净化样本中的氯霉素。但是采用通常的预处理方法，检测回收率不高，不能有效的消除杂质干扰。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法，采用此方法可以提高检测回收率，有效消除杂质干扰。

本发明的另一个目的是提供一种乳或乳制品中氯霉素的检测方法，采用此方法检测灵敏度高，检测时间短。

本发明提供了一种检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法，其包括以下步骤：

在样品中加入样品提取剂得到样品提取液，将样品提取液依次经涡旋处理、超声处理和离心处理后取得一上清液，吹干上清液后所得物质用浓度为10%的甲醇溶液溶解，得到第一溶解液；

依次用甲醇、超纯水流过固相提取小柱，然后将第一溶解液经固相提取小柱净化和富集，再用超纯水流过固相提取小柱后抽干固相提取小柱；

向抽干后的固相提取小柱中分别加入同等比例的甲醇和乙酸乙酯用于洗脱，收集的洗脱液吹干后，用浓度为50%的甲醇溶解得到第二溶液，将第二溶液经涡旋处理后再用微孔滤膜过滤。

在检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法的一种示意性实施方式中，样品提取剂为乙酸乙酯。

在检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法的一种示意性实施方式中，在第一个步骤中用氮气吹干上清液。

本发明还提供了一种乳或乳制品中氯霉素的检测方法，其包括以下步骤：

a）制备氯霉素标准溶液，利用超高效液相色谱-电喷雾串联三重四极杆质谱仪检测，从而生成氯霉素的标准曲线图；

b）利用上述预处理方法制备预处理溶液；

c）利用超高效液相色谱-电喷雾串联三重四极杆质谱仪在与步骤a）相同的条件下检测预处理溶液，得到一检测结果；

d）将步骤c）中获得的检测结果与步骤a）中得到的标准曲线进行对比，通过计算确定样品中的氯霉素含量。

乳或乳制品中氯霉素的检测方法的一种示意性实施方式中，步骤a）中的氯霉素标准溶液为5种不同浓度的氯霉素标准溶液，5种不同浓度的氯霉素标准溶液的浓度分别为5.0ng/mL、1.0ng/mL、0.5ng/mL、0.3ng/mL、0.1ng/mL。

检测乳或乳制品中氯霉素的预处理方法中，离心处理后得到上清液被吹干后得到的物质用10%的甲醇溶液溶解，10%的甲醇溶液可以充分溶解氯霉素，减少其在处理过程中的损失，同时10%的甲醇溶液在净化过程中不会影响固相提取小柱的吸附，因而可以提高检测的回收率。而且在第一溶液经固相提取小柱净化和富集后，用超纯水淋洗固相提取小柱，可除去固相提取小柱中富集的极性物质，可消除有机溶剂的干扰，提高预处理方法的回收率和准确度。另外，利用同等比例的甲醇和乙酸乙酯洗脱，甲醇的极性为6.6，乙酸乙酯的极性为4.3，采用上述溶液可以更加针对目标物的极性，使洗脱更完全，洗脱更干净，以提高最终检测的回收率。

附图说明

以下附图仅对本发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。

图1是氯霉素的总离子流谱图,其横坐标表示时间（min）,纵坐标表示离子流响应信号强度的大小。

图2是氯霉素子离子中定量离子的色谱图，其横坐标表示时间（min）, 纵坐标表示离子流响应信号强度的大小。

图3是氯霉素子离子中定性离子的色谱图，其横坐标表示时间（min）, 纵坐标表示离子流响应信号强度的大小。

图4是氯霉素的标准曲线图，其横坐标表示氯霉素的浓度，单位为纳克/毫升(ng/mL)，纵坐标表示离子响应信号强度。

具体实施方式

下面将结合具体实施方案对本发明的方法做更详细的说明。本领域技术人员应当理解，下述实施例均用于对本发明所要求保护的范围进行实例性的描述，以此概括本发明的各参数的相对范围，因而不能将之理解为对本发明的一种具体限制。

在本文中，样品包括乳样品或乳制品样品，以下实施例采用的是牛奶样品，但本领域技术人员可以理解，也可以在采用其他样品。

实施例1

1）标准溶液的配制：